人粒细胞集落剌激因子cDNA的克隆及其在小鼠骨髓瘤细胞中的稳定表达

来源 :中华血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mynickelly
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应用PCR等方法从人膀胱癌细胞系5637总RNA中扩增并克隆了人G-CSFcDNA。经序列分析鉴定含有人G-CSF基因的全部编码序列。在成熟蛋白基因第43位codon出现一个碱基突变(CAC→TAC)导致一个氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。构建了其逆转录病毒重组载体(XM6-GCSF),并将其导入小鼠骨髓瘤细胞SP2/O。体外软琼脂集落培养(CFU-GM)检严显示转化的SP2/O细胞培养上清具有G-CSF活性,能有效地刺激小鼠骨髓造血祖细胞分化和增殖形成中性粒细胞集落。证明重组载体可在小鼠骨髓瘤细胞中持续稳定表达,第43位氨基酸置换没有使G-CSF失活。

其他文献
采用生物素标记cDNA探针原位杂交和流式细胞仪測量,初步观察了人HI-Meg细胞系经维甲酸诱导48小时和72小时的基因表达变化与其多倍体分化的关系。结果c-myc, v-sis, c-fms癌基因表达下降;N-ras, v-abl庙基因表达无明显变化;造血调控因子L1F基因表达明显增强。HI-Meg细胞胞体增大,多核和核分叶细胞増多,4n和8n细胞显著增多。
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应用微量培养细胞快速磷脂转换的薄层层析方法,以淋巴瘤Raji细胞系和白血病J6-1细胞系为对象,对比研究了天然I型干扰素(IFN)对生长因子刺激磷脂转换的影响,发现:经IFN处理48小时后,Raji细胞主要的磷脂(PC、PS、PIP、PIP2)转换明显降低,而J6-1细胞却没有改变;IFN拮抗生长因子刺激的PIP2转换与抑制3H-TdR掺入和抗Raji细胞增殖呈正相关。由于细胞磷脂转换是发生在生长
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将精制的抗人IgG抗体致敏羊红细胞作为指示剂,用于直接指示血小板抗原抗体反应,从而建立了新型的简易血小板血淸学技术(SEPSA)。可用于血小板血型的研究,检测血小板自身及同种抗体(包括HLA抗体),检测表面结合IgG抗体,解决了交叉配合试验难题。本法简易、快速、稳定、敏感、特异性强。指示细胞可长期保存(1年),已组成试剂盒有利于推广应用。
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