【摘 要】
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[背景]防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) H78是分离于油菜根际的一株生防菌,其能合成藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)等多种广谱抗生素,H78的rsmA/E双突变体中Plt合成被完全
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点试验室 上海200240
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[背景]防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) H78是分离于油菜根际的一株生防菌,其能合成藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)等多种广谱抗生素,H78的rsmA/E双突变体中Plt合成被完全抑制.[目的]通过转座子诱变技术,筛选H78△rsmA/E双突变体中重新激活Plt合成的下游调控因子.[方法]通过同源重组的方法在pltL基因下游插入红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因来指示Plt操纵子表达的激活情况;利用转座子随机插入突变、半随机PCR技术筛选并定位目标基因;通过基因回补等方法进一步验证基因功能.[结果]从约2万株H78△rsmA/E的转座子突变体中筛选到一株高产Plt和某种黑色素的菌株,并确定其插入位点为hmgA基因,hmgA基因回补能重新抑制H78△rsmA/E的Plt合成.[结论]假单胞菌双突变体H78△rsmA/E中hmgA基因对Plt的合成存在强烈抑制作用,是潜在的RsmA/E下游调控基因.本研究为进一步阐明Plt合成的调控机制与网络及通过基因工程提高Plt产量奠定了基础.
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