【摘 要】
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目的:构建真核细胞翻译起始因子3第4亚单位(eIF3s4)真核表达载体用于进一步功能研究.方法:设计引物, 以K562细胞的总RNA为模板, 采用RT-PCR方法扩增eIF3s4的全长编码区cDNA,
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目的:构建真核细胞翻译起始因子3第4亚单位(eIF3s4)真核表达载体用于进一步功能研究.方法:设计引物, 以K562细胞的总RNA为模板, 采用RT-PCR方法扩增eIF3s4的全长编码区cDNA, 克隆于pGEM-T Easy载体, 经DNA测序并与GenBank数据库序列进行比对后, 将该cDNA序列亚克隆于真核表达载体pcDNA4/HisMaxB载体, 构建成(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达载体, 用Lipofectamine TM2000瞬时转染人乳腺癌细胞株Bcap37, 利用Western blot方法检测(His)6-eIF3s4融合蛋白的表达.结果:DNA序列测定表明, 利用RT-PCR方法克隆的eIF3s4全长编码区cDNA序列与GenBank数据库序列一致, Western blot结果证实(His)6-eIF3s4融合蛋白在Bcap37细胞中获得预期表达.结论:成功地构建了eIF3s4的真核表达载体并在人乳腺癌细胞Bcap37中表达, 为建立稳定的eIF3s4高表达细胞系, 进而研究eIF3s4与肿瘤细胞多药耐药相关性打下了基础.
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