【摘 要】
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通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列,并将其克隆到表达载体pET 32a(+)中,得到重组质粒pET-TCS,在表达宿主菌BL21trxB(DE3)中高效表达,产生相对分子质量
【机 构】
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安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室,安徽省教育学院
【基金项目】
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安徽省自然科学基金，江苏省自然科学基金
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通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列,并将其克隆到表达载体pET 32a(+)中,得到重组质粒pET-TCS,在表达宿主菌BL21trxB(DE3)中高效表达,产生相对分子质量约为62 000的融合蛋白.该融合蛋白包括112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白.实验结果表明,随着诱导时间的延长,表达的融合蛋白产量逐渐增加,表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的39.14%;在15、25和37 ℃ 3个不同的诱导温度下,均能诱导产生融合蛋白,而且产生的总
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