【摘 要】
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构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量
【机 构】
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滨州医学院遗传学教研室,山东烟台,264003;湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室,湖北武汉,430062
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构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量为56 438.此基因推导的氨基酸序列与Cellulomonas fimi的Man26A和Cellvibrio japonicus的mannanase A氨基酸序列同源性分别为64.3％、38％.将此基因的成熟肽的编码序列克隆到表达载体pHBM905上,得到重组质粒pHBM730,将pHBM730经SalI酶切线性化后转化3株毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168,该甘露聚糖酶基因在这3种毕赤酵母中均实现分泌表达.将此3种重组毕赤酵母GS115 (pHBM730)、KM71( pHBM730)、SMD1168( pHBM730)诱导产酶,对这3种重组酶进行相关的酶学性质研究.分析表明,在KM71中表达量最高,其最适反应pH值均约为6.6,最适反应温度均约为45℃.在最适反应条件下测得其酶活力为19.64 U.此结果为瓜尔豆胶降解产物的工业化应用提供了参考.
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