【摘 要】
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L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine,L-Ala-L-Gln）,是目前国内外公认的L-谷氨酰胺载体,在临床医学和营养学等领域有广泛应用。为了减少丙谷二肽在生物酶法生产过程中菌
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(30970058);国家自然科学基金(21176106);工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)开放课题基金(KLIB-ZR200801)
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L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine,L-Ala-L-Gln）,是目前国内外公认的L-谷氨酰胺载体,在临床医学和营养学等领域有广泛应用。为了减少丙谷二肽在生物酶法生产过程中菌体对其降解,利用λRed同源重组系统,敲除大肠杆菌中肽酶D和氨肽酶对应的编码基因。与野生型菌株相比,双敲除突变菌株的全细胞酶活提高了0.29倍。对该菌株进行摇瓶发酵优化,得到最优培养基为（g/L）:葡萄糖12、酵母提取物10、胰蛋白胨10、（NH4）2SO4 1、KH2PO4 3、K2HPO4 1、MgSO4 0.2;最优发酵温度为27℃;最佳反应条件为:Gln 200 mmol/L、Ala-Ome·HCl 200 mmol/L,反应p H 8.5,反应温度25℃。在最优条件下发酵36 h,丙谷二肽产量达到了14.51g/L反应液,是优化前的4.74倍。
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