【摘 要】
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目的 研究酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂(ACATI,58-035)对脂质负荷人系膜细胞系(HMCL)细胞内脂质稳态的影响.方法 油红O染色观察细胞内脂滴变化.偶氮四唑盐(MTT)法了解细
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目的 研究酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂(ACATI,58-035)对脂质负荷人系膜细胞系(HMCL)细胞内脂质稳态的影响.方法 油红O染色观察细胞内脂滴变化.偶氮四唑盐(MTT)法了解细胞增殖.高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内游离胆固醇(Fc)和胆固醇酯(CE).Western印迹法检测ACATI对HMCL ACATl和腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCAl)的蛋白表达.荧光实时定量PCR检测ACATI对HMCL ACAT1、ABCA1和低密度脂蛋白(LDL)受体的影响.瞬时转染检测ACATI对HMCL ACATl pl启动子的影响.结果 100mg/L LDL明显增加HMCL内脂滴和CE含量.10 mg/L ACATI 58-035没有细胞毒性,且能显著抑制LDL导致的脂滴形成和CE含量增加(相对对照比值,分别是1 .91±0 .36和1 .07±0 .30,P＜0 .01).100 mg/L LDL主要在蛋白水平增加ACAT1表达(为对照1 .27倍),在10 mg/LACATI 58-035共同作用时,ACATl蛋白表达进一步增加(为对照1 .77倍);100 mg/L LDL明显上调HMCL ABCA1 mRNA表达[为对照(2 .97±0 .39)倍,P＜0 .01],明显下调LDL受体mRNA表达[为对照(O .08±0 .02)倍,P＜0 .01],在10 mg/L ACATI 58-035共同作用时,HMCLABCA1的蛋白和mRNA表达进一步上调[为对照(4 .41±1 .27)倍,与LDL作用组比较,P＜O .05],LDL受体mRNA表达进一步下调[为对照(0 .04±0 .005)倍,与LDL作用组比较,P＜0 .01].结论 脂质负荷HMCL在一定剂量ACATI作用下,细胞内CE含量明显减少,FC并没有明显增加,这与HMCL上调ABCA1蛋白和mRNA表达、下调LDL受体mRNA表达有关.脂质负荷主要引起HMCL ACAT1蛋白表达增加.
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