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摘要：目的探讨骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白的表达及其意义。方法选取本院2007年1 月～2013年12月骨肉瘤标本，用免疫组织化学SP法检测骨肉瘤中Slug和E钙粘蛋白的表达，对结合临床资料进行分析。
结果：18例骨肉瘤标本纳入研究，在骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白阳性表达率分别为81.3%和25.0%。结合骨肉瘤临床病理特征的分析发现，Slug、E钙粘蛋白表达与骨肉瘤转移发生相关，同时还发现骨肉瘤标本中Slug 表达与E 钙粘蛋白表达为负相关。
结论：Slug、E钙粘蛋白的表达联合检测可以作为判断骨肉瘤出现转移的指标。
关键词：骨肉瘤；Slug 基因；E钙粘蛋白；转移
骨肉瘤为最常见的骨原发恶性肿瘤，该瘤恶性程度甚高，预后极差，研究表示80%的骨肉瘤患者病例中都会有肺部微小转移灶[1]。尽管近年来外科手术和化疗方面取得了长足的进展，但骨肉瘤患者的长期生存率至今仍徘徊在65%左右[2]，目前暂没有有效的手段发现骨肉瘤早期转移的指标。随着近年发展，分子学检测手段作为早期判断骨肉瘤转移发挥越来越大的作用。而上皮细胞间质化（EMT）学说在骨科领域有初步的研究[3]。EMT 发生于如胚胎发育、伤口愈合、细胞迁移、肿瘤转移等级联反应的早期阶段[4]。Slug属转录抑制因子中的Snail 锌指蛋白超家族，与靶基因启动区E-box相互结合被认为是EMT的启动因素。而E钙粘蛋白的减少或缺失被认为发生EMT现象，同时伴随着波形蛋白等间质性标记物表达的增加。研究表明，Slug过度表达与卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等肿瘤的转移、发生发展密切相关。但目前在骨肉瘤对于Slug、E钙粘蛋白的作用和意义鲜有报道。本文通过研究它们在骨肉瘤中的表达以及相互之间的关系，对于评估骨肉瘤的发生、发展及预后具有重要意义，也为骨肉瘤临床治疗提供了一定的理论依据。
1材料和方法
1.1 材料
选取我院2007年1月～2013 年6 月手术取得的骨肉瘤标本，术前未行化疗、放疗，术后所有标本均作病理检查。其中，男10例，女8例，年龄9～64 岁，中位年龄18 岁。胫骨7例，股骨11例。骨肉瘤Ennecking 外科分期如下：
Ⅰ期1例，ⅡA期2例，ⅡB期7例，Ⅲ期8例。失访3例，有肺转移者13例，无肺转移者5例。
1.2 实验方法
1.2.1 标本的处理挑选出组织包埋很好以及肿瘤细胞丰富的蜡块作4μm 连续切片。
1.2.2 染色步骤病理标本免疫组织化学染色采用S-P 法，按产品说明书操作，图像分析系统进行分析。
1.3 判断标准
免疫组织化学法是以细胞出现棕黄色染色为阳性信号。
1.4 统计学处理
计数资料采用卡方检验，等级资料采用Spearman等级相关分析，取0.05作为统计学检验显著性标准。采用SPSS 13.0统计软件进行分析。
2 结果
2.1 免疫组织化学染色结果Slug蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率是81.3%。E钙粘蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率是25.0%。由卡方检验可得出，Slug蛋白和E钙粘蛋白在骨肉瘤组织中的表达具有显著差异性（χ2=8.501，P <0.05）。
2.2 Slug表达与E钙粘蛋白在骨肉瘤中表达的相关性分析
运用spearman等级相关分析slug、E 钙粘蛋白二者之间的相互关系，在18例骨肉瘤组织中，我们分析发现：Slug 蛋白的表达与E 钙粘蛋白的表达呈明显负相关（r =-0.745，P <0.05），差异具有显著性。
3 讨论
近年来对肿瘤抑制基因和癌基因的深入研究己初步揭示了某些肿瘤的发病机制和病因。国内外研究发现，肿瘤的发生发展还与细胞凋亡失衡相关。EMT 是上皮细胞与细胞外因子相互作用过程中失去极性及细胞间紧密连接获得移行和游走能力，转化成具有间质特性的过程。EMT 机制研究的发展对肿瘤侵袭和转移提供了有益帮助。骨肉瘤的转移是否也存在EMT 机制，EMT的发生与那些因素相关，目前还没有明确答案。Slug基因属于Snail锌指蛋白超家族，与Snail基因有高度同源性，可以对靶基因的表达进行有效地调节，还可以与靶基因启动区E-box相互结合。本研究通过18例骨肉瘤病例标本检测，发现Slug在有转移和没有转移的骨肉瘤组织标本中差异有显著性。E钙粘蛋白也是EMT的关键分子[5]。
本研究18例骨肉瘤病例标本检测中Slug蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率为81.3%，E 钙粘蛋白表达阳性率为25.0%，差异有显著性。通过病历随访资料分析发现：在有转移的13例骨肉瘤组织中E 钙粘蛋白的表达，阴性表达为11例，阳性表达只有2 例占15.3%；在无转移的5例骨肉瘤组织中E 钙粘蛋白的表达，阳性表达达到3例占60%（P <0.05），阴性表达仅2例。运用Spearman 等级相关分析，在18例骨肉瘤组织中Slug 蛋白的表达与E 钙粘蛋白的表达呈明显负相关。
目前国内外就骨肉瘤组织中Slug、E 钙粘蛋白表达与骨肉瘤转移的相关研究极少。本研究进一步证实Slug、E 钙粘蛋白表达可以作为骨肉瘤转移级联反应的早期阶段指标。但是骨肉瘤细胞转移受到了多种基因的调控，Slug、E 钙粘蛋白如何调节骨肉瘤的转移途径，值得我们深入探讨。
参考文献：
[1]GUARINO M，MICHELI P，PALLOTTI F，et al.Pathological relevance of epithelial and mesenchymal phenotype plasticity[J].Pathol Res Pract，1999，195（6）：379-389.
[2]步國强，于秀淳.MTA1在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预后的关系[J].中国矫形外科杂志.2009（03）：22-23
[3]YANG G，YUAN J，LI K.EMT transcription factors：implication in osteosarcoma[J].Medical Oncology（Northwood，London，England），2013，30（4）：697.
[4]VALASTYAN S，WEINBERG RA.Tumor metastasis：molecular insights and evolving paradigms[J].Cell，2011，147（2）：275-292.
[5]PATRIARCA C，MACCHI RM，MARSCHNER AK，et al.Epithelial cell adhesion molecule expression（CD326）in cancer：a short review[J].Cancer Treat Rev，2012，38（1）：68-75.
结果：18例骨肉瘤标本纳入研究，在骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白阳性表达率分别为81.3%和25.0%。结合骨肉瘤临床病理特征的分析发现，Slug、E钙粘蛋白表达与骨肉瘤转移发生相关，同时还发现骨肉瘤标本中Slug 表达与E 钙粘蛋白表达为负相关。
结论：Slug、E钙粘蛋白的表达联合检测可以作为判断骨肉瘤出现转移的指标。
关键词：骨肉瘤；Slug 基因；E钙粘蛋白；转移
骨肉瘤为最常见的骨原发恶性肿瘤，该瘤恶性程度甚高，预后极差，研究表示80%的骨肉瘤患者病例中都会有肺部微小转移灶[1]。尽管近年来外科手术和化疗方面取得了长足的进展，但骨肉瘤患者的长期生存率至今仍徘徊在65%左右[2]，目前暂没有有效的手段发现骨肉瘤早期转移的指标。随着近年发展，分子学检测手段作为早期判断骨肉瘤转移发挥越来越大的作用。而上皮细胞间质化（EMT）学说在骨科领域有初步的研究[3]。EMT 发生于如胚胎发育、伤口愈合、细胞迁移、肿瘤转移等级联反应的早期阶段[4]。Slug属转录抑制因子中的Snail 锌指蛋白超家族，与靶基因启动区E-box相互结合被认为是EMT的启动因素。而E钙粘蛋白的减少或缺失被认为发生EMT现象，同时伴随着波形蛋白等间质性标记物表达的增加。研究表明，Slug过度表达与卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等肿瘤的转移、发生发展密切相关。但目前在骨肉瘤对于Slug、E钙粘蛋白的作用和意义鲜有报道。本文通过研究它们在骨肉瘤中的表达以及相互之间的关系，对于评估骨肉瘤的发生、发展及预后具有重要意义，也为骨肉瘤临床治疗提供了一定的理论依据。
1材料和方法
1.1 材料
选取我院2007年1月～2013 年6 月手术取得的骨肉瘤标本，术前未行化疗、放疗，术后所有标本均作病理检查。其中，男10例，女8例，年龄9～64 岁，中位年龄18 岁。胫骨7例，股骨11例。骨肉瘤Ennecking 外科分期如下：
Ⅰ期1例，ⅡA期2例，ⅡB期7例，Ⅲ期8例。失访3例，有肺转移者13例，无肺转移者5例。
1.2 实验方法
1.2.1 标本的处理挑选出组织包埋很好以及肿瘤细胞丰富的蜡块作4μm 连续切片。
1.2.2 染色步骤病理标本免疫组织化学染色采用S-P 法，按产品说明书操作，图像分析系统进行分析。
1.3 判断标准
免疫组织化学法是以细胞出现棕黄色染色为阳性信号。
1.4 统计学处理
计数资料采用卡方检验，等级资料采用Spearman等级相关分析，取0.05作为统计学检验显著性标准。采用SPSS 13.0统计软件进行分析。
2 结果
2.1 免疫组织化学染色结果Slug蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率是81.3%。E钙粘蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率是25.0%。由卡方检验可得出，Slug蛋白和E钙粘蛋白在骨肉瘤组织中的表达具有显著差异性（χ2=8.501，P <0.05）。
2.2 Slug表达与E钙粘蛋白在骨肉瘤中表达的相关性分析
运用spearman等级相关分析slug、E 钙粘蛋白二者之间的相互关系，在18例骨肉瘤组织中，我们分析发现：Slug 蛋白的表达与E 钙粘蛋白的表达呈明显负相关（r =-0.745，P <0.05），差异具有显著性。
3 讨论
近年来对肿瘤抑制基因和癌基因的深入研究己初步揭示了某些肿瘤的发病机制和病因。国内外研究发现，肿瘤的发生发展还与细胞凋亡失衡相关。EMT 是上皮细胞与细胞外因子相互作用过程中失去极性及细胞间紧密连接获得移行和游走能力，转化成具有间质特性的过程。EMT 机制研究的发展对肿瘤侵袭和转移提供了有益帮助。骨肉瘤的转移是否也存在EMT 机制，EMT的发生与那些因素相关，目前还没有明确答案。Slug基因属于Snail锌指蛋白超家族，与Snail基因有高度同源性，可以对靶基因的表达进行有效地调节，还可以与靶基因启动区E-box相互结合。本研究通过18例骨肉瘤病例标本检测，发现Slug在有转移和没有转移的骨肉瘤组织标本中差异有显著性。E钙粘蛋白也是EMT的关键分子[5]。
本研究18例骨肉瘤病例标本检测中Slug蛋白在骨肉瘤组织中表达的阳性率为81.3%，E 钙粘蛋白表达阳性率为25.0%，差异有显著性。通过病历随访资料分析发现：在有转移的13例骨肉瘤组织中E 钙粘蛋白的表达，阴性表达为11例，阳性表达只有2 例占15.3%；在无转移的5例骨肉瘤组织中E 钙粘蛋白的表达，阳性表达达到3例占60%（P <0.05），阴性表达仅2例。运用Spearman 等级相关分析，在18例骨肉瘤组织中Slug 蛋白的表达与E 钙粘蛋白的表达呈明显负相关。
目前国内外就骨肉瘤组织中Slug、E 钙粘蛋白表达与骨肉瘤转移的相关研究极少。本研究进一步证实Slug、E 钙粘蛋白表达可以作为骨肉瘤转移级联反应的早期阶段指标。但是骨肉瘤细胞转移受到了多种基因的调控，Slug、E 钙粘蛋白如何调节骨肉瘤的转移途径，值得我们深入探讨。
参考文献：
[1]GUARINO M，MICHELI P，PALLOTTI F，et al.Pathological relevance of epithelial and mesenchymal phenotype plasticity[J].Pathol Res Pract，1999，195（6）：379-389.
[2]步國强，于秀淳.MTA1在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预后的关系[J].中国矫形外科杂志.2009（03）：22-23
[3]YANG G，YUAN J，LI K.EMT transcription factors：implication in osteosarcoma[J].Medical Oncology（Northwood，London，England），2013，30（4）：697.
[4]VALASTYAN S，WEINBERG RA.Tumor metastasis：molecular insights and evolving paradigms[J].Cell，2011，147（2）：275-292.
[5]PATRIARCA C，MACCHI RM，MARSCHNER AK，et al.Epithelial cell adhesion molecule expression（CD326）in cancer：a short review[J].Cancer Treat Rev，2012，38（1）：68-75.