【摘 要】
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目的:探讨miR-18b-5p调控神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法:qRT-PCR检测人正常乳腺癌上皮细胞MCF-10A与2株乳腺癌细胞株(SKBR-3和SKBR-3/PR)中miR-18b-5p的表达水平;Western blotting检测SKBR-3/PR细胞来源外泌体的表面标志物;CCK8和Transwell实验检测SKBR-3/PR细胞转染miR-18b-5p inhibitor并提取的外泌体与SKBR-3细胞共培养后对SKBR-3细胞增殖和
【机 构】
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蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室,安徽 蚌埠233030;蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室,安徽 蚌埠233030
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目的:探讨miR-18b-5p调控神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法:qRT-PCR检测人正常乳腺癌上皮细胞MCF-10A与2株乳腺癌细胞株(SKBR-3和SKBR-3/PR)中miR-18b-5p的表达水平;Western blotting检测SKBR-3/PR细胞来源外泌体的表面标志物;CCK8和Transwell实验检测SKBR-3/PR细胞转染miR-18b-5p inhibitor并提取的外泌体与SKBR-3细胞共培养后对SKBR-3细胞增殖和侵袭、迁移能力.生物信息学预测软件Target Scan预测miR-18b-5p与NEDD9的靶向结合位点.双荧光素酶实验分析miR-18b-5p与NEDD9的靶向调控关系.Transwell实验检测上调NEDD9对SKBR-3细胞侵袭迁移能力的影响.结果:miR-18b-5p在乳腺癌细胞株中相对于正常乳腺癌上皮细胞中高表达(P<0.01);SKBR-3/PR细胞来源的外泌体高表达CD63和TSG101等特异性蛋白(P<0.01),SKBR-3/PR细胞转染miR-18b-5p inhibitor提取外泌体后对SKBR-3细胞的增殖、侵袭和迁移显著被抑制(P<0.01).生物信息学软件Target Scan预测结果显示,NEDD93\'UTR上存在潜在与miR-18b-5p靶向结合的位点,miR-18b-5p能够负向调控NEDD9基因表达(P<0.01).过表达NEDD9能抑制SKBR-3细胞侵袭能力(P<0.01).结论:miR-18b-5p通过靶向NEDD9促进乳腺癌细胞侵袭、迁移.
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