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【摘要】 目的 探讨研究高效液相色谱法测定复方清火口服液中黄芩苷的含量。方法 色谱柱：AgilentTC-C18柱（4.6×150mm，5μm，Agilent），流动相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（30﹕70），流速为1.0mL·min-1，检测波长为274nm，进样量为10ul。结果 黄芩苷线性关系良好；精密度和准确度均为良好；回收率在96.71%-99.83%；供试品溶液室温放置6h稳定。结论 本研究所得方法操作简单、快速，重现性好，可准确测定复方清火口服液中黄芩苷的含量，用于复方清火口服液的质量控制。
【关键词】 复方清火口服液；黄芩苷；HPLC法；含量测定
文章编号：1004-7484（2013）-12-7629-02
复方清火口服液是临床常用的解毒泻火、清热燥湿、止血化瘀的复方中药，由黄芩、黄连、大黄、金银花等中药组成[1]，临床主要广泛应用于热毒所致身热烦躁、咽喉肿痛、口舌生疮、便秘等，疗效显著。黄芩主要是具有抗炎作用，其中活性最强的是黄芩苷[2]。2010版药典中以黄芩苷作为黄芩的含量控制指标[3]。为了更快速、有效的控制复方复方清火口服液的质量，笔者建立了一套高效液相色谱方法测定黄芩苷，该方法操作简单、快速，重现性好，可用于复方清火口服液的质量控制。
1 实验材料
1.1 仪器与设备 Agilent1290型高效液相色谱仪（配有脱气机、自动进样器、恒温箱、液相色谱泵、柱温箱及紫外检测器），由Chemstation化学工作站系统控制（Agilent，德国）；METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平（METTLER）；XW-80A涡旋混合器（上海沪西）；TGL16M型冷冻离心机（长沙英泰）；AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（艾科浦，重庆颐洋）；DL-360A型超声波清洗仪（上海之信）。
1.2 试药与材料 黄芩苷对照品：由（中国药品生物制品检定研究院提供，批号：200815）；复方复方清火口服液为院内自制，3个批次的样品批号分别为：130702，130703，130704；甲醇：美国Tedia公司，色谱纯，批号：1202257；磷酸：天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯，批号：110215；纯水：自制去离子超纯水。
2 方法和結果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6×150mm，5μm，Agilent）；保护柱：Gemini C18（4×3.0mm，10μm，Phenomenex，美国）；进样量：10ul。流动相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（30﹕70）；流速为1.0mL·min-1；检测波长为274nm；柱温：30℃。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取黄芩苷对照品50mg，置于50ml容量瓶中，加适量流动相溶解后，再用流动相稀释至刻度线，摇匀，即得浓度为1mg·ml-1的黄芩苷对照品储备溶液，置于4℃冰箱保存，备用。
2.2.2 供试品溶液的配制 取复方清火口服液1ml，置于10ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，充分摇匀，精密量取5ml至50ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，取上清液经0.22um的微孔滤膜过滤后即得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照液 按复方清火口服液的处方组成及制剂方法，制备不含黄芩的空白口服液，作为阴性对照制剂，阴性样品溶液制备方法同供试品溶液的配制。
2.3 系统适用性与专属性考察 上述色谱条件下，取对照品溶液、阴性对照液、供试品溶液适量，分别进样10ul。观察三份溶液的色谱图。黄芩苷的理论塔板数不低于3000，分离度大于1.5，主峰周围无干扰峰，对照液与供试液中黄芩苷的保留时间一致，专属性好。
2.4 线性关系考察 精密移取浓度为1mg·ml-1的黄芩苷对照品储备溶液适量，用流动相稀释成系列标准溶液，浓度分别为40、20、10、5、2.5、1.25ng·uL-1，进样10ul。记录各浓度的峰面积。结果得出，黄芩苷在1.25ng·uL-1-40ng·uL-1范围内线性关系良好，得线性回归方程为Y=631.3X+13.22，相关系数为0.9997（n=5）。
2.5 精密度考察 取浓度为5ng·uL-1的对照品工作溶液，每个浓度平行配制5份，分别进样10ul，记录峰面积。结果得RSD值为0.69%，表明精密度良好。
2.6 重复性考察 取批号为“130702”批次的供试品6份，按上述供试品溶液制备方法处理，进样10ul，记录峰面积。结果得出黄芩苷峰面积的RSD值为0.78%，表明重现性良好。
2.7 加样回收率考察 精密移取同一已知浓度的供试品溶液1ml，平行5份，分别加入中浓度的对照品工作溶液1ml，混匀，进样，记录峰面积。本实验所得黄芩苷的加样回收率为96.71%-99.83%，RSD为0.81%。
2.8 稳定性考察 取同一份供试品溶液，分别在室温下放置0、4、6h后测定，记录色谱峰。结果所得供试品溶液在室温下放置6h后测定所得黄芩苷的RSD值分别为0.74%，可说明室温放置6h稳定。
2.9 样品含量测定 取3个待检批次的样品，按上述处理方法制成供试品溶液，进样10ul，记录峰面积。具体结果见表1。
3 小 结
本研究所得方法操作简单、快速，重现性好，可用于复方清火口服液的质量控制。
参考文献
[1] 孙晓菊，饶春恺.复方清火口服液中黄芩苷的含量测定及稳定性研究[J].时珍国医国药，2004，15（6）：329-330.
[2] 苏英英，杨东花，黄壮壮，等.高效液相色谱法测定咳露口服液中黄芩苷含量[J].中国药业，2012，21（17）：26-27.
[3] 唐亮，刘皈阳，马建丽，等.高效液相色谱法测定清咽饮口服液中黄芩苷的含量[J].儿科药学杂志，2013，19（5）：44-45.
【关键词】 复方清火口服液；黄芩苷；HPLC法；含量测定
文章编号：1004-7484（2013）-12-7629-02
复方清火口服液是临床常用的解毒泻火、清热燥湿、止血化瘀的复方中药，由黄芩、黄连、大黄、金银花等中药组成[1]，临床主要广泛应用于热毒所致身热烦躁、咽喉肿痛、口舌生疮、便秘等，疗效显著。黄芩主要是具有抗炎作用，其中活性最强的是黄芩苷[2]。2010版药典中以黄芩苷作为黄芩的含量控制指标[3]。为了更快速、有效的控制复方复方清火口服液的质量，笔者建立了一套高效液相色谱方法测定黄芩苷，该方法操作简单、快速，重现性好，可用于复方清火口服液的质量控制。
1 实验材料
1.1 仪器与设备 Agilent1290型高效液相色谱仪（配有脱气机、自动进样器、恒温箱、液相色谱泵、柱温箱及紫外检测器），由Chemstation化学工作站系统控制（Agilent，德国）；METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平（METTLER）；XW-80A涡旋混合器（上海沪西）；TGL16M型冷冻离心机（长沙英泰）；AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（艾科浦，重庆颐洋）；DL-360A型超声波清洗仪（上海之信）。
1.2 试药与材料 黄芩苷对照品：由（中国药品生物制品检定研究院提供，批号：200815）；复方复方清火口服液为院内自制，3个批次的样品批号分别为：130702，130703，130704；甲醇：美国Tedia公司，色谱纯，批号：1202257；磷酸：天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯，批号：110215；纯水：自制去离子超纯水。
2 方法和結果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6×150mm，5μm，Agilent）；保护柱：Gemini C18（4×3.0mm，10μm，Phenomenex，美国）；进样量：10ul。流动相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（30﹕70）；流速为1.0mL·min-1；检测波长为274nm；柱温：30℃。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取黄芩苷对照品50mg，置于50ml容量瓶中，加适量流动相溶解后，再用流动相稀释至刻度线，摇匀，即得浓度为1mg·ml-1的黄芩苷对照品储备溶液，置于4℃冰箱保存，备用。
2.2.2 供试品溶液的配制 取复方清火口服液1ml，置于10ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，充分摇匀，精密量取5ml至50ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，取上清液经0.22um的微孔滤膜过滤后即得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照液 按复方清火口服液的处方组成及制剂方法，制备不含黄芩的空白口服液，作为阴性对照制剂，阴性样品溶液制备方法同供试品溶液的配制。
2.3 系统适用性与专属性考察 上述色谱条件下，取对照品溶液、阴性对照液、供试品溶液适量，分别进样10ul。观察三份溶液的色谱图。黄芩苷的理论塔板数不低于3000，分离度大于1.5，主峰周围无干扰峰，对照液与供试液中黄芩苷的保留时间一致，专属性好。
2.4 线性关系考察 精密移取浓度为1mg·ml-1的黄芩苷对照品储备溶液适量，用流动相稀释成系列标准溶液，浓度分别为40、20、10、5、2.5、1.25ng·uL-1，进样10ul。记录各浓度的峰面积。结果得出，黄芩苷在1.25ng·uL-1-40ng·uL-1范围内线性关系良好，得线性回归方程为Y=631.3X+13.22，相关系数为0.9997（n=5）。
2.5 精密度考察 取浓度为5ng·uL-1的对照品工作溶液，每个浓度平行配制5份，分别进样10ul，记录峰面积。结果得RSD值为0.69%，表明精密度良好。
2.6 重复性考察 取批号为“130702”批次的供试品6份，按上述供试品溶液制备方法处理，进样10ul，记录峰面积。结果得出黄芩苷峰面积的RSD值为0.78%，表明重现性良好。
2.7 加样回收率考察 精密移取同一已知浓度的供试品溶液1ml，平行5份，分别加入中浓度的对照品工作溶液1ml，混匀，进样，记录峰面积。本实验所得黄芩苷的加样回收率为96.71%-99.83%，RSD为0.81%。
2.8 稳定性考察 取同一份供试品溶液，分别在室温下放置0、4、6h后测定，记录色谱峰。结果所得供试品溶液在室温下放置6h后测定所得黄芩苷的RSD值分别为0.74%，可说明室温放置6h稳定。
2.9 样品含量测定 取3个待检批次的样品，按上述处理方法制成供试品溶液，进样10ul，记录峰面积。具体结果见表1。
3 小 结
本研究所得方法操作简单、快速，重现性好，可用于复方清火口服液的质量控制。
参考文献
[1] 孙晓菊，饶春恺.复方清火口服液中黄芩苷的含量测定及稳定性研究[J].时珍国医国药，2004，15（6）：329-330.
[2] 苏英英，杨东花，黄壮壮，等.高效液相色谱法测定咳露口服液中黄芩苷含量[J].中国药业，2012，21（17）：26-27.
[3] 唐亮，刘皈阳，马建丽，等.高效液相色谱法测定清咽饮口服液中黄芩苷的含量[J].儿科药学杂志，2013，19（5）：44-45.