【摘 要】
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为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RT-PCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测
【机 构】
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河南省农业科学院 畜牧兽医研究所,河南 郑州 450002南京农业大学 动物医学院, 江苏 南京 210095;河南省农业科学院 畜牧兽医研究所,河南 郑州,450002;普莱柯生物工程股份有限公司,
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为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RT-PCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测序.将Pme Ⅰ内切酶线性化的重组穿梭载体质粒(pAdTrack-sVIP)电转化大肠杆菌BJ5183,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行同源重组,提取重组后的腺病毒质粒,经内切酶PacⅠ线性化后转染HEK-293A细胞,装配成完整的病毒粒子rAd-sVIP.重组腺病毒rAd-sVIP感染细胞后,可见绿色荧光蛋白的表达.RT-PCR、Western blot检测结果表明,重组腺病毒rAd-sVIP可正确表达猪Viperin蛋白,且表达的猪Viperin蛋白具有良好的反应原性,对PRRSV的复制具有明显的抑制作用.
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