【摘 要】
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目的 筛选人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义核酸结合位点.方法 合成20mer随机寡核苷酸文库,与体外转录的全长hTERT cRNA杂交,RNase H切割后,经引物延伸、放射自显影,筛选出
【机 构】
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贵阳医学院附属医院泌尿外科,贵阳医学院附属医院图书馆
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目的 筛选人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义核酸结合位点.方法 合成20mer随机寡核苷酸文库,与体外转录的全长hTERT cRNA杂交,RNase H切割后,经引物延伸、放射自显影,筛选出26个反义结合位点(AAS).结合RNAstructure软件分析,选定具有显著茎环结构的7个位点作为最佳反义结合位点,合成其反义寡核苷酸(AS-ODN),转染前列腺癌细胞PC-3,运用噻唑蓝(MTT)比色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别对前列腺癌细胞生长抑制及hTERT mRNA表达情况进行检测.结果 AS-ODN1-7转染前列腺癌细胞PC-3后,细胞生长受到明显抑制,其中AS-ODN3的抑制作用最明显(40.6±1.0)％,与各组抑制率差异有统计学意义(P＜0.05),hTERTmRNA表达水平亦受到明显抑制,亦以AS-ODN3的抑制作用最明显(35.8±1.2)％,与各组抑制率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 筛选hTERT基因AAS并合成AS-ODN能有效封闭目的基因.
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