本研究的目的是建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛奶中大肠杆菌 O157:H7 的新方法。用偶联有异硫氰酸荧光素（FITC）的大肠杆菌 O157 单克隆抗体对大肠杆菌 O157:H7 进行特异性标记，通过优化抗体反应条件，建立流式检测方法，然后对磷酸盐缓冲溶液（PBS）和人工污染牛奶样品中不同浓度的大肠杆菌 O157:H7 进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在 PBS 中的检测范围为 2.57 × 103 ~ 1.12 × 108 CFU/m L，灵敏度达到 2.57 × 103 CFU/m L。将所建立的流式检测方法应用于牛奶样品检测，当人工污染牛奶样品中大肠杆菌 O157:H7 的浓度在 2.31 × 104 ~ 1.48 × 108 CFU/m L 之间时，流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致，方法的灵敏度为 2.31 × 104 CFU/m L，检测时间为 35 min。该方法能快速、定量地检测出牛奶样品中的大肠杆菌 O157:H7，在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。