评价机械牵张预处理对机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)γ-氨基丁酸(GABA)信号通路活化的影响。
方法体外培养人AECⅡ细胞株(A549细胞),分为对照组(C组)、机械牵张组(P1组)和机械牵张预处理组(P2组)。C组常规培养;P1组给予20%应变率的机械牵张6 h;P2组给予5%应变率预牵张60 min后,将应变率调整为20%继续牵张6 h。采用甲基噻唑蓝法测定细胞活性;采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液中白细胞介素(IL-1β、IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定谷氨酸脱羧酶(GAD)和γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)的蛋白表达。
结果与C组比较,P1组细胞活性明显降低(A值:0.196±0.071比0.886±0.107),LDH释放率明显升高〔(12.3±2.4)%比(1.9±0.5)%〕;细胞培养液中IL-1β、IL-6及TNF-α含量和mRNA表达量均明显升高〔IL-1β(ng/L):138.6±19.7比32.7±7.4,IL-6(ng/L):196.5±31.7比55.4±13.8,TNF-α(ng/L):111.3±21.8比20.8±7.6;IL-1β mRNA(2-ΔΔCT):2.79±0.44比0.83±0.12,IL-6 mRNA(2-ΔΔCT):1.99±0.25比0.56±0.11,TNF-α mRNA(2-ΔΔCT):2.54±0.37比0.72±0.09〕;GAD和GABAAR蛋白表达均明显下调〔GAD(灰度值):0.38±0.12比1.75±0.45,GABAAR(灰度值):0.29±0.09比1.68±0.39;均P<0.05〕。与P1组比较,P2组细胞活性明显上调(A值:0.523±0.132比0.196±0.071),LDH释放率明显降低〔(6.9±1.7)%比(12.3±2.4)%〕;细胞培养液中IL-1β、IL-6及TNF-α含量和mRNA表达量均明显降低〔IL-1β(ng/L):79.2±11.6比138.6±19.7,IL-6(ng/L):89.6±15.6比196.5±31.7,TNF-α(ng/L):55.9±11.4比111.3±21.8);IL-1β mRNA(2-ΔΔCT):1.92±0.36比2.79±0.44,IL-6 mRNA(2-ΔΔCT):1.09±0.18比1.99±0.25,TNF-α mRNA(2-ΔΔCT):1.77±0.25比2.54±0.37〕;GAD和GABAAR蛋白表达均明显下调〔GAD(灰度值):1.26±0.33比0.38±0.12,GABAAR(灰度值):1.04±0.15比0.29±0.09;均P<0.05〕。
结论机械牵张预处理可减轻体外培养机械牵张致人AECⅡ损伤,其机制与激活GABA信号通路有关。