【摘 要】
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目的定量检测慢性乙型肝炎患者血清乙肝病毒RNA和肝组织乙肝病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA),分析两种定量指标动态变化及其相关性。方法应用PSAD酶消化+滚环扩增+跨缺口实
【机 构】
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首都医科大学附属北京地坛医院检验科; 中国人民解放军第五医学中心; 清华大学第一附属医院ICU; 北京大学医学部微生物教研室;
【基金项目】
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首都医科大学附属北京地坛医院院内课题(编号:DTYM201604);吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金(编号:320.6750.19019)
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目的定量检测慢性乙型肝炎患者血清乙肝病毒RNA和肝组织乙肝病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA),分析两种定量指标动态变化及其相关性。方法应用PSAD酶消化+滚环扩增+跨缺口实时荧光PCR方法,定量检测患者甲醛固定石蜡包埋肝组织HBV cccDNA(cccDNA copies/cell),用qPCR定量检测血清样本中HBV RNA的表达水平。结果在慢性乙型肝炎免疫耐受期、免疫清除期、低复制期、HBeAg阴性期患者的血清HBV RNA水平中位数分别是1.01×10~8copies/mL、3.18×10~6 copies/mL、5.56×10~3 copies/mL和3.8×10~5 copies/mL。在慢性乙型肝炎中,患者血清RNA水平只在免疫清除期与肝组织cccDNA具有相关性(r=0.328=0.016),两者在免疫耐受期、低复制期、HBeAg阴性期均没有相关性(r=-0.003,P=0.995;r=-0.581,P=0.171;r=0.041,P=0.870)。HBV RNA复制效率,定义为血清中乙肝病毒RNA载量与肝组织中HBV cccDNA的比值(所有的统计量都经过了对数值转换),其在急性期肝炎患者中明显地低于慢性期患者(0.37 vs.0.99,P<0.05)。在慢性乙型肝炎的免疫耐受期、e抗原阴性期HBV RNA复制效率显著高于低复制期(1.005 vs.0.66,P=0.025;0.90 vs.0.66,P=0.048),在其他几期中差异没有统计学意义。结论在未经治疗的乙型肝炎患者中,血清HBV RNA水平可反映处于慢性乙肝免疫清除期患者肝组织内HBV cccDNA水平,但不能反映慢性乙肝免疫耐受期、低复制期和HBeAg阴性期患者肝组织内HBV cccDNA水平;急性乙肝免疫清除期患者的HBV RNA复制效率明显低于慢性期患者。
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