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摘 要：目的：建立复方益母草流浸膏中梓醇的含量测定方法，为其质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法对复方益母草流浸膏中梓醇的含量进行测定，Hypersil C18柱(4.6 mm×200 mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05 moL·L-1KH2PO4溶液(2∶98)；检测波长：205 nm；流速0.8 mL/min；柱温：25℃。结果：标准曲线为Y=-0.02688 X+30.179，r=0.9995，梓醇在0.1mg·mL-1~1.0mg·mL-1之间线性关系良好，平均回收率为98.60%，RSD%=1.16%(n=5)。结论：该法简便、灵敏、准确，可用于复方益母草流浸膏的质量控制。
关键词：复方益母草流浸膏；HPLC；梓醇
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-044-02
复方益母草流浸膏出自中华人民共和国卫生部中药成方制剂(第十九册WS3-B-1791-94)，由益母草、熟地黄、当归组成，具有调经活血、祛瘀生新的作用，为治疗月经不调的常用方。多年的临床应用表明复方益母草流浸膏是一个疗效好，作用确切，副作用小的治疗月经不调的代表方剂，具有广阔的应用前景。为更有效地控制其内在质量，保证疗效，本文采用高效液相色谱法测定方中梓醇的含量。
1 仪器与试药
Agilent1100型液相色谱仪，DAD紫外检测器；Agilent1100 色谱工作站(美国)；超声波清洗器(CQ-250型)。
梓醇(批号：110808-200508，中国药品生物制品检定所)，复方益母草流浸膏(北京市东升药业有限责任公司，自购)，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Hypersil C18柱(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液(2∶98)；检测波长：205nm；流速0.8mL·min-1；柱温：25℃。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的梓醇对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
称取复方益母草流浸膏样品2g，精密称定，置25ml量瓶中，加50%乙醇适量超声提取20min，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜(0.45μm)，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
取缺熟地药材的阴性样品，照2.3项下方法制备阴性对照品溶液，即得。
2.5 标准曲线的绘制
精密吸取梓醇对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置1mL棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。取20μL进样，以梓醇的峰面积为纵坐标，以梓醇的浓度(mg·mL-1)为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=-0.02688X+30.179，r=0.9995，梓醇的浓度在 0.1mg·mL-1~1.0mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 系统适用性试验
精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20μl，按2.1项下所述色谱条件注入液相色谱仪中测定，记录色谱图。结果表明：在梓醇对照品相应色谱保留时间位置上，供试品溶液有相应的色谱峰与之对应，而阴性无干扰。
2.7 精密度试验
精密吸取2.2项下对照品溶液20μl，按2.1项下色谱条件重复进样6次，记录峰色谱图，结果峰面积分值的相对标准差(RSD)为1.72%，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
取2.3项下溶液0，2，4，6，8，10h时，按2.1项下色谱条件分别进样20μl，按梓醇的峰面积计算，结果峰面积积分值的RSD为2.34%，表明供试品溶液在10h内稳定。
2.9 重现性试验
取同一批样品(批号：070503)5份，分别按2.3项下方法制备成供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进样20μl。结果样品中梓醇含量的平均值为0.229mg·g-1(RSD=0.94%，n=5)，表明本方法重现性良好。
2.10 回收率试验
精密称取经同法测定，己知含量的同批(批号：070504)样品5份，每份1g，再分别准确加入梓醇对照品适量，按2.3项下方法制备成供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样20μl，测定峰面积积分值，计算回收率，结果表明，该方法回收率良好，RSD=1.18%，结果详见表1。
2.11 样品测定
按照上述方法和色谱条件测定3批样品中梓醇含量，结果为0.229mg·g-1、0.235mg·g-1、0.232mg·g-1。见图1、图2。
图1 梓醇对照品色谱图
图2 梓醇样品色谱图
3 讨论
(1)實验结果表明，本文建立的高效液相色谱法测定梓醇的含量测定方法，能够快速、有效地分析复方益母草膏方药中梓醇的含量。
(2)梓醇在紫外区为末端吸收，吸收值低，干扰大，根据文献报道[1，3]，通过多次试验，波长为205nm时梓醇的吸收峰较大且干扰小，效果满意。在流动相的选择中，比较了水-甲醇系统、水-乙腈系统、乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液和直接用水为流动相等多种情况，发现水-甲醇系统梓醇对照品峰始终为双峰，水-乙腈系统梓醇对照品峰形较好，但与其它峰分离欠佳，而选用乙腈-0.05 moL·L-1KH2PO4溶液，在样品分析中梓醇与其它峰均能达到基线分离，保留时间适中，柱效最高，因而选用乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液为流动相。
参考文献：
[1] 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：383.
[2] 和健，王健国，穆丽华.HPLC法测定清消颗粒中梓醇的含量[J].中国中药，2003，28(9)：882~883.
[3] 朱坤福.高效液相色谱法测定地黄颗粒中梓醇的含量[J].海峡药学，2004，16(1)：58~60.
(责任编辑：姜付平)
关键词：复方益母草流浸膏；HPLC；梓醇
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-044-02
复方益母草流浸膏出自中华人民共和国卫生部中药成方制剂(第十九册WS3-B-1791-94)，由益母草、熟地黄、当归组成，具有调经活血、祛瘀生新的作用，为治疗月经不调的常用方。多年的临床应用表明复方益母草流浸膏是一个疗效好，作用确切，副作用小的治疗月经不调的代表方剂，具有广阔的应用前景。为更有效地控制其内在质量，保证疗效，本文采用高效液相色谱法测定方中梓醇的含量。
1 仪器与试药
Agilent1100型液相色谱仪，DAD紫外检测器；Agilent1100 色谱工作站(美国)；超声波清洗器(CQ-250型)。
梓醇(批号：110808-200508，中国药品生物制品检定所)，复方益母草流浸膏(北京市东升药业有限责任公司，自购)，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Hypersil C18柱(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液(2∶98)；检测波长：205nm；流速0.8mL·min-1；柱温：25℃。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的梓醇对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
称取复方益母草流浸膏样品2g，精密称定，置25ml量瓶中，加50%乙醇适量超声提取20min，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜(0.45μm)，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
取缺熟地药材的阴性样品，照2.3项下方法制备阴性对照品溶液，即得。
2.5 标准曲线的绘制
精密吸取梓醇对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置1mL棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。取20μL进样，以梓醇的峰面积为纵坐标，以梓醇的浓度(mg·mL-1)为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=-0.02688X+30.179，r=0.9995，梓醇的浓度在 0.1mg·mL-1~1.0mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 系统适用性试验
精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20μl，按2.1项下所述色谱条件注入液相色谱仪中测定，记录色谱图。结果表明：在梓醇对照品相应色谱保留时间位置上，供试品溶液有相应的色谱峰与之对应，而阴性无干扰。
2.7 精密度试验
精密吸取2.2项下对照品溶液20μl，按2.1项下色谱条件重复进样6次，记录峰色谱图，结果峰面积分值的相对标准差(RSD)为1.72%，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
取2.3项下溶液0，2，4，6，8，10h时，按2.1项下色谱条件分别进样20μl，按梓醇的峰面积计算，结果峰面积积分值的RSD为2.34%，表明供试品溶液在10h内稳定。
2.9 重现性试验
取同一批样品(批号：070503)5份，分别按2.3项下方法制备成供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进样20μl。结果样品中梓醇含量的平均值为0.229mg·g-1(RSD=0.94%，n=5)，表明本方法重现性良好。
2.10 回收率试验
精密称取经同法测定，己知含量的同批(批号：070504)样品5份，每份1g，再分别准确加入梓醇对照品适量，按2.3项下方法制备成供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样20μl，测定峰面积积分值，计算回收率，结果表明，该方法回收率良好，RSD=1.18%，结果详见表1。
2.11 样品测定
按照上述方法和色谱条件测定3批样品中梓醇含量，结果为0.229mg·g-1、0.235mg·g-1、0.232mg·g-1。见图1、图2。
图1 梓醇对照品色谱图
图2 梓醇样品色谱图
3 讨论
(1)實验结果表明，本文建立的高效液相色谱法测定梓醇的含量测定方法，能够快速、有效地分析复方益母草膏方药中梓醇的含量。
(2)梓醇在紫外区为末端吸收，吸收值低，干扰大，根据文献报道[1，3]，通过多次试验，波长为205nm时梓醇的吸收峰较大且干扰小，效果满意。在流动相的选择中，比较了水-甲醇系统、水-乙腈系统、乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液和直接用水为流动相等多种情况，发现水-甲醇系统梓醇对照品峰始终为双峰，水-乙腈系统梓醇对照品峰形较好，但与其它峰分离欠佳，而选用乙腈-0.05 moL·L-1KH2PO4溶液，在样品分析中梓醇与其它峰均能达到基线分离，保留时间适中，柱效最高，因而选用乙腈-0.05moL·L-1KH2PO4溶液为流动相。
参考文献：
[1] 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：383.
[2] 和健，王健国，穆丽华.HPLC法测定清消颗粒中梓醇的含量[J].中国中药，2003，28(9)：882~883.
[3] 朱坤福.高效液相色谱法测定地黄颗粒中梓醇的含量[J].海峡药学，2004，16(1)：58~60.
(责任编辑：姜付平)