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采用单因素、多因素正交试验研究南方红豆杉枝叶中10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（10-DABⅢ）、紫衫醇的高效液相色谱（HPLC）检测方法及检测样制备。结果显示，检测样制备采用10倍量甲醇于40 ℃恒温水浴条件下浸提3 h，即可使 10-DABⅢ、紫杉醇得率达到峰值，且提取时间不宜超过3 h，否则会导致检出结果比实际含量偏低。由于采用 10-DABⅢ、紫杉醇混合同时检测，结果发现选择适当的流动相梯度洗脱方案较为关键，较好的洗脱方案会使检测图谱的基线分离较好。