PPVSC-1株VP2基因的定点突变及真核表达载体的构建

来源 :四川农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：gm5w56002

【摘要】

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以PPV VP2为基础，利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位（A）和214位（B）的半胱氨酸突变为精氨酸，并将突变体克隆入pMD19-TSimple载体中；经酶切、PCR和测序鉴定后，利用KpnⅠ和BamH

【作者】

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胡秋炅徐志文郭万柱朱玲王印王小玉

【机构】

：

四川农业大学动物医学院

【出处】

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四川农业大学学报

【发表日期】

：

2008年3期

【关键词】

：

猪细小病毒 VP2 基因定点突变 PPV VP2 gene site-directed mutation

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目（30500019）,四川省科技厅科技攻关项目.

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以PPV VP2为基础，利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位（A）和214位（B）的半胱氨酸突变为精氨酸，并将突变体克隆入pMD19-TSimple载体中；经酶切、PCR和测序鉴定后，利用KpnⅠ和BamHⅠ酶切位点，定向克隆入真核表达载体pPI-2．EGFP中，构建突变体与报告基因EGFP融合表达的pPI-2．EGFP．VP2（A）和pPI-2．EGFP．VP2（B）真核表达载体；利用脂质体法将重组质粒分别转染COS-7细胞。结果：成功构建了突变体的真核表达载体；在转染后的荧光观察中发现，

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