燐光探针法研究不同变性剂对大肠杆菌碱性磷酸酶构象的影响

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通过监测大肠杆菌碱性磷酸酶 (AP)的 10 9位色氨酸 (Trp 10 9)室温光 (RTP)的强度与寿命的变化 ,探讨了变性剂酸、盐酸胍及EDTA对AP构象变化的影响。结果表明 :光强度、光寿命与Trp 10 9所处的微环境刚性化程度有密切的关系。尤其是盐酸胍的加入 ,AP经历了典型的 3种变化状态 :从稳定折叠态到中间态 ,最后形成展开态。极少量的EDTA加入 ,导致蛋白质变性、光减弱和光寿命缩短。 The conformational changes of AP at denaturing acid, guanidine hydrochloride and EDTA were investigated by monitoring the intensity and life span of RTP at 10 9 Trp 10 9 of Escherichia coli alkaline phosphatase (AP) Impact. The results showed that the light intensity and light life are closely related to the microenvironmental rigidity of Trp109. Especially with the addition of guanidine hydrochloride, AP experienced three typical changes: from the stable folded state to the intermediate state, and finally to the developed state. A very small amount of EDTA is added, leading to protein denaturation, caking and calendering life shortening.
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