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目的构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的E.coli-BCG (Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体. 方法用多聚酶链式反应(PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白(Hsp)60 N端6个氨基酸及其上游调控元件基因,克隆入E.coli-BCG穿梭载体pOLYG中,以屋尘螨抗原(Der p2)为外源蛋白,用间接免疫荧光染色法观察该载体介导的Der p2基因在牡牛分枝杆菌(M.vaccae)宿主中的表达. 结果经测序证实所克隆的Hsp60ss基因序列正确,所构建的胞浆内表达E.coli-BCG穿梭载体(pIC)能完成在大肠杆菌和M.vaccae细胞之间的穿梭,并介导抗生素抗性基因的表达,经免疫荧光检查外源基因Der p2可表达于M.vaccae宿主胞内,并受到培养温度的调节. 结论成功构建了在M.vaccae胞内表达外源蛋白的E.coli-BCG穿梭载体.