目的利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用。方法运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合制备多糖蛋白结合疫苗。选取30只约3周龄无特定病原体(SPF)雌性SD大鼠,体重88~102 g,随机分成实验组和对照组,每组15只。对幼龄SD大鼠进行疫苗接种,实验组接种Hib-PsaA疫苗,对照组接种磷酸盐缓冲液(PBS)。每2周接种1次,3次接种后检测动物血清相关抗体免疫球蛋白G(IgG)水平。然后对实验组及对照组大鼠分别以肺炎球菌经鼓膜穿刺注入中耳以诱发AOM,观察2组大鼠发生AOM的炎症反应情况。结果运用酰胺缩合法将Psa A与Hib多糖偶联结合,结合物的洗脱峰明显前移,表明细菌多糖与载体蛋白结合成功。接种该结合疫苗的实验组幼龄大鼠产生的抗Psa A抗体Ig G的几何平均滴度(GMT)为11 138,抗Hib抗体Ig G的GMT为7 017,而对照组抗PsaA抗体IgG的GMT与抗Hib抗体Ig G的GMT分别为729和348。实验组2种抗体Ig G均明显高于对照组(P<0.001)。肺炎球菌攻击后组织病理学检查发现,实验组大鼠在细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示Hib-Psa A结合疫苗对肺炎球菌诱发的大鼠AOM有免疫保护作用。结论运用酰胺缩合法可成功将PsaA蛋白与Hib多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼龄大鼠体内可诱导分别针对Psa A和Hib多糖的有效免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的大鼠AOM。