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【摘 要】目的：采用免疫组织化学方法（S-P法）检测MMP-3在子宫内膜癌、粘膜下子宫肌瘤、正常子宫内膜组织中的表达情况，分析其与子宫内膜癌临床生物学行为的关系。探讨其在子宫内膜癌的发生、浸润和转移中的作用。方法：选取本院2009年10月--2011年8月子宫内膜癌手术切除及活检的标本共59例，粘膜下子宫肌瘤21例及正常子宫内膜20例。采用免疫组织化学方法（S-P法）检测子宫内膜癌组织、粘膜下子宫肌瘤组织中MMP-3蛋白表达情况，分析其表达情况与子宫内膜癌患者年龄、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期等临床生物学行为的关系。结果：子宫内膜癌组织中MMP-3的阳性表达率为80.0%（47/59），高于正常子宫内膜粘膜中的阳性表达率15.0%（3/20），二者比较差异有显著性（P<0.05）。MMP-3在浸润型组的阳性表达率为85.7%，高于局限型组的阳性表达率70.8%，二者比较差异无显著性（P>0.250）；在低分化组的阳性表达率为91.3%高于高/中分化组的阳性表达率72.2%，二者比较差异有显著性（P<0.05）；在有淋巴结转移组的阳性表达率为100%，高于无淋巴结转移组的阳性表达率52.4%，二者比较差异有显著性（P<0.05）；在III-IV期组中的阳性表达率为90.9%，高于I-II期组的阳性表达率65.4%，二者比较差异有显著性（P<0.05）。结论：子宫内膜癌组织中MMP-3阳性表达率明显高于正常子宫内膜粘膜，说明子宫内膜癌组织中MMP-3表达增高参与了ECM的降解，奠定了子宫内膜癌侵袭转移的基础。MMP-3的表达随着癌灶的增大、分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结的转移、临床分期的增加而明显增强。
【关键词】子宫内膜癌；MMP-3；生物学行为；免疫组织化学
【中图分类号】R71 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0001-01
子宫内膜癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，子宫内膜癌的发生和发展仍是目前研究的重点。子宫内膜癌的发生、发展是一个多因素、多步骤的过程，涉及到多方面机制。基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases 3， MMP-3）能降解组织基底膜和细胞外基质中的层粘连蛋白（LN）及纤粘连蛋白（FN）等多种基质成分，为恶性肿瘤的浸润、转移及肿瘤间质血管的新生提供有利条件。本研究是通过检测MMP-3蛋白在宫颈癌组织中的表达，观察其与子宫内膜癌组织临床生物学行为的关系，探讨MMP-3蛋白在子宫内膜癌组织发生、发展过程中的作用。
1 对象与方法
1.1 研究对象：选取在我院妇科2009年10月至2011年8月行手术切除及门诊活检的病理标本，其中子宫内膜癌组织59例、粘膜下子宫肌瘤组织21例及正常子宫内膜组20例。子宫内膜癌组年龄26～82（47.06±11.49）岁，粘膜下子宫肌瘤组28～70（44.37±11.76）岁，正常子宫内膜组38～63（49.15±6.17）岁。病理类型：腺癌50例，其它癌9例（包括腺癌伴鳞状上皮分化4例、浆液性癌3例、透明细胞癌2例）。病理分化程度：高中分化36例，低分化23例。临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期14例，Ⅲa期18例，Ⅲb期13例，Ⅳ期2例。在59例宫颈癌病例中31例行手术治疗（Ⅰ期12例，Ⅱ期14例，Ⅲ期5例），手术病理示发现淋巴结转移者10例，未发现淋巴结转移者21例。粘膜下子宫肌瘤21例。所有患者手术前均未经放疗或化疗。
1.1 实验方法
免疫组织化学染色方法及染色步骤：取组织切片应用免疫组织化学（S-P）法，检测子宫内膜癌组织、粘膜下子宫肌瘤组织及正常子宫内膜中MMP-3蛋白的表达。
1.2 结果判断
用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。光学显微镜下MMP-3蛋白表达主要位于癌细胞的胞浆中，癌巢周边的基质、癌周单核（主要为巨噬细胞）、成纤维细胞、血管内皮细胞也有少量表达。结果判断标准参照Fromowitz阳性细胞半定量分级法。随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，先根据阳性细胞所占的百分数计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51 %～75%为3分，> 75%为4分；再根据阳性细胞染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后根据两者相加所得的总分进行结果判定：0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～5分为中度阳性（++），6～7分为强阳性（+++）。
1.3 统计方法
数据应用SPSS12.0统计软件进行统计学分析，采用计数资料X2检验，spearman等级相关分析，各检验方法皆以P<0.05为差异显著标准，为具有统计学意义。
2 结果
2.1 MMP-3在正常子宫内膜、粘膜下子宫肌瘤及子宫内膜癌组织中的表达
MMP-3在20例正常子宫内膜中阳性率为15.0%（3/20）， 在21例粘膜下子宫肌瘤中阳性率为38.1% （8/21），在59例子宫内膜癌组织中阳性率是80.0%（47/59），三组间差异有显著性（X2=33.1600， p<0. 05） ；正常子宫内膜组与粘膜下子宫肌瘤组之间差异无显著性（Z=-1.830， p>0.05） 正常子宫内膜组与子宫内膜癌组之间差异有显著性（Z=-5.099， p<0.05） 。粘膜下子宫肌瘤组与子宫内膜癌组之间差异有显著性（Z=-3. 692，P<0.05），子宫内膜癌组MMP-3表达高于正常子宫内膜组及粘膜下子宫肌瘤组
2.2 子宫内膜癌组织中MMP-3的表达与临床病理特征的关系
MMP-3蛋白表达阳性率在Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期（x2=5. 848，p<0.05）， 有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组（x2=5. 019，p <0. 05），差异有统计学意义。低分化组的MMP-3表达率高于高中分化组（x2=4.879，p <0. 05），差异有统计学意义。腺癌中MMP-3表达率高于其它癌，但两组相比差别无统计学意义（x2=2.016，p>0.05）。即子宫内膜癌中MMP-3的表达与年龄、大体类型、组织类型均无关。 3 结论
子宫内膜癌组织中MMP-3阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织，说明子宫内膜癌中高表达的MMP-3参与了ECM的降解，为子宫内膜癌侵袭转移的发生提供了前提。
MMP-3的表达随着分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结的转移、临床分期的增加而明显增强。MMP-3的高表达预示着随着子宫内膜癌的生长、分化程度的降低其侵袭和转移能力逐渐增强。
4 讨论
近年来对肿瘤细胞浸润转移的生物学机制进行了大量研究[1]。现有研究使人们逐渐意识到转移过程中的一个关键就是肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）的能力。因为ECM是肿瘤细胞移动所遇到的自然屏障，其中基底膜（basement membrane，BM）的完整与否是影响肿瘤细胞移动的关键环节。基底膜（BM）是特化的ECM，它不是单纯起分隔作用，还藉Ⅳ型胶原与基质中的微纤维直接连结，保持组织间的相互作用。光镜下BM厚1-1.5mm包括近细胞膜的透明层及近间质的致密层。
目前研究发现MMP-3在多种恶性肿瘤中呈现过表达。乳腺癌细胞株中转染MMPs诱导因子使MMP-3生成增多，肿瘤转移能力亦增强[2]。Torn等[3]检测了70例宫颈癌患者和130例正常人MMP-3的表达，结果发现宫颈癌组织MMP-3的表达高于正常组织，且与肿瘤大小、淋巴结转移、浸润深度及临床分期有关。研究还发现MMP-3在宫颈癌中的表达也与肿瘤生长方式、浸润深度、淋巴转移、病理分化、远隔转移及患者的不良预后相关，可作为宫颈癌浸润转移的重要分子标志，并作为独立判断患者预后的指标。
本研究用免疫组化法检测了59例子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中MMP-3蛋白的表达，结果显示子宫内膜癌组织中MMP-3蛋白表达的阳性率为79.66%，明显高于相应正常子宫内膜组织15.00%，两者比较差异有显著性（P<0.05），提示子宫内膜癌组织中存在MMP-3的过度激活。
本研究发现MMP-3主要表达于癌细胞的胞浆中，癌巢和正常组织交接部位及间质细胞也有表达，有利于癌细胞的浸润。此外子宫内膜癌伴有淋巴结转移者明显高于不伴淋巴结转移者（P<0.05），临床分期Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌组织MMP-3蛋白表达水平明显高于I、II期宫颈癌组织（ P<0.05）。
以上结果表明，子宫内膜癌组织分泌MMP-3降解了基底膜和细胞外基质，促进了癌细胞向周围组织浸润，是反映子宫内膜癌恶性进展的一个比较可靠的指标。为开辟肿瘤治疗新途径打下理论基础。
在治疗上，对患者给予化学干预治疗，抑制MMP-3的表达，有可能阻断或逆转癌前病变，抑制子宫内膜癌转移，降低患者死亡率，这将为子宫内膜癌治疗提供极富吸引力的前景。
综上所述，子宫内膜癌组织中MMP-3表达的失调在宫颈癌发生、发展、侵袭转移过程中发挥着重要作用。检测子宫内膜癌组织及淋巴结中MMP-3表达对子宫内膜癌侵袭转移的预测、预后评估及指导合理的综合治疗等具有重要的临床意义。
参考文献：
[1] Ramos-DeSimone N， Hahn-Dantona E，Sipley J， et al.Activation of Matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） a converging plasmin/stromelysin-1 cascade enhances tumor cell invasion[J]. J Biol Chem，1999，274（19）：13066～13076
【关键词】子宫内膜癌；MMP-3；生物学行为；免疫组织化学
【中图分类号】R71 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0001-01
子宫内膜癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，子宫内膜癌的发生和发展仍是目前研究的重点。子宫内膜癌的发生、发展是一个多因素、多步骤的过程，涉及到多方面机制。基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases 3， MMP-3）能降解组织基底膜和细胞外基质中的层粘连蛋白（LN）及纤粘连蛋白（FN）等多种基质成分，为恶性肿瘤的浸润、转移及肿瘤间质血管的新生提供有利条件。本研究是通过检测MMP-3蛋白在宫颈癌组织中的表达，观察其与子宫内膜癌组织临床生物学行为的关系，探讨MMP-3蛋白在子宫内膜癌组织发生、发展过程中的作用。
1 对象与方法
1.1 研究对象：选取在我院妇科2009年10月至2011年8月行手术切除及门诊活检的病理标本，其中子宫内膜癌组织59例、粘膜下子宫肌瘤组织21例及正常子宫内膜组20例。子宫内膜癌组年龄26～82（47.06±11.49）岁，粘膜下子宫肌瘤组28～70（44.37±11.76）岁，正常子宫内膜组38～63（49.15±6.17）岁。病理类型：腺癌50例，其它癌9例（包括腺癌伴鳞状上皮分化4例、浆液性癌3例、透明细胞癌2例）。病理分化程度：高中分化36例，低分化23例。临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期14例，Ⅲa期18例，Ⅲb期13例，Ⅳ期2例。在59例宫颈癌病例中31例行手术治疗（Ⅰ期12例，Ⅱ期14例，Ⅲ期5例），手术病理示发现淋巴结转移者10例，未发现淋巴结转移者21例。粘膜下子宫肌瘤21例。所有患者手术前均未经放疗或化疗。
1.1 实验方法
免疫组织化学染色方法及染色步骤：取组织切片应用免疫组织化学（S-P）法，检测子宫内膜癌组织、粘膜下子宫肌瘤组织及正常子宫内膜中MMP-3蛋白的表达。
1.2 结果判断
用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。光学显微镜下MMP-3蛋白表达主要位于癌细胞的胞浆中，癌巢周边的基质、癌周单核（主要为巨噬细胞）、成纤维细胞、血管内皮细胞也有少量表达。结果判断标准参照Fromowitz阳性细胞半定量分级法。随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，先根据阳性细胞所占的百分数计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51 %～75%为3分，> 75%为4分；再根据阳性细胞染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后根据两者相加所得的总分进行结果判定：0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～5分为中度阳性（++），6～7分为强阳性（+++）。
1.3 统计方法
数据应用SPSS12.0统计软件进行统计学分析，采用计数资料X2检验，spearman等级相关分析，各检验方法皆以P<0.05为差异显著标准，为具有统计学意义。
2 结果
2.1 MMP-3在正常子宫内膜、粘膜下子宫肌瘤及子宫内膜癌组织中的表达
MMP-3在20例正常子宫内膜中阳性率为15.0%（3/20）， 在21例粘膜下子宫肌瘤中阳性率为38.1% （8/21），在59例子宫内膜癌组织中阳性率是80.0%（47/59），三组间差异有显著性（X2=33.1600， p<0. 05） ；正常子宫内膜组与粘膜下子宫肌瘤组之间差异无显著性（Z=-1.830， p>0.05） 正常子宫内膜组与子宫内膜癌组之间差异有显著性（Z=-5.099， p<0.05） 。粘膜下子宫肌瘤组与子宫内膜癌组之间差异有显著性（Z=-3. 692，P<0.05），子宫内膜癌组MMP-3表达高于正常子宫内膜组及粘膜下子宫肌瘤组
2.2 子宫内膜癌组织中MMP-3的表达与临床病理特征的关系
MMP-3蛋白表达阳性率在Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期（x2=5. 848，p<0.05）， 有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组（x2=5. 019，p <0. 05），差异有统计学意义。低分化组的MMP-3表达率高于高中分化组（x2=4.879，p <0. 05），差异有统计学意义。腺癌中MMP-3表达率高于其它癌，但两组相比差别无统计学意义（x2=2.016，p>0.05）。即子宫内膜癌中MMP-3的表达与年龄、大体类型、组织类型均无关。 3 结论
子宫内膜癌组织中MMP-3阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织，说明子宫内膜癌中高表达的MMP-3参与了ECM的降解，为子宫内膜癌侵袭转移的发生提供了前提。
MMP-3的表达随着分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结的转移、临床分期的增加而明显增强。MMP-3的高表达预示着随着子宫内膜癌的生长、分化程度的降低其侵袭和转移能力逐渐增强。
4 讨论
近年来对肿瘤细胞浸润转移的生物学机制进行了大量研究[1]。现有研究使人们逐渐意识到转移过程中的一个关键就是肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）的能力。因为ECM是肿瘤细胞移动所遇到的自然屏障，其中基底膜（basement membrane，BM）的完整与否是影响肿瘤细胞移动的关键环节。基底膜（BM）是特化的ECM，它不是单纯起分隔作用，还藉Ⅳ型胶原与基质中的微纤维直接连结，保持组织间的相互作用。光镜下BM厚1-1.5mm包括近细胞膜的透明层及近间质的致密层。
目前研究发现MMP-3在多种恶性肿瘤中呈现过表达。乳腺癌细胞株中转染MMPs诱导因子使MMP-3生成增多，肿瘤转移能力亦增强[2]。Torn等[3]检测了70例宫颈癌患者和130例正常人MMP-3的表达，结果发现宫颈癌组织MMP-3的表达高于正常组织，且与肿瘤大小、淋巴结转移、浸润深度及临床分期有关。研究还发现MMP-3在宫颈癌中的表达也与肿瘤生长方式、浸润深度、淋巴转移、病理分化、远隔转移及患者的不良预后相关，可作为宫颈癌浸润转移的重要分子标志，并作为独立判断患者预后的指标。
本研究用免疫组化法检测了59例子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中MMP-3蛋白的表达，结果显示子宫内膜癌组织中MMP-3蛋白表达的阳性率为79.66%，明显高于相应正常子宫内膜组织15.00%，两者比较差异有显著性（P<0.05），提示子宫内膜癌组织中存在MMP-3的过度激活。
本研究发现MMP-3主要表达于癌细胞的胞浆中，癌巢和正常组织交接部位及间质细胞也有表达，有利于癌细胞的浸润。此外子宫内膜癌伴有淋巴结转移者明显高于不伴淋巴结转移者（P<0.05），临床分期Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌组织MMP-3蛋白表达水平明显高于I、II期宫颈癌组织（ P<0.05）。
以上结果表明，子宫内膜癌组织分泌MMP-3降解了基底膜和细胞外基质，促进了癌细胞向周围组织浸润，是反映子宫内膜癌恶性进展的一个比较可靠的指标。为开辟肿瘤治疗新途径打下理论基础。
在治疗上，对患者给予化学干预治疗，抑制MMP-3的表达，有可能阻断或逆转癌前病变，抑制子宫内膜癌转移，降低患者死亡率，这将为子宫内膜癌治疗提供极富吸引力的前景。
综上所述，子宫内膜癌组织中MMP-3表达的失调在宫颈癌发生、发展、侵袭转移过程中发挥着重要作用。检测子宫内膜癌组织及淋巴结中MMP-3表达对子宫内膜癌侵袭转移的预测、预后评估及指导合理的综合治疗等具有重要的临床意义。
参考文献：
[1] Ramos-DeSimone N， Hahn-Dantona E，Sipley J， et al.Activation of Matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） a converging plasmin/stromelysin-1 cascade enhances tumor cell invasion[J]. J Biol Chem，1999，274（19）：13066～13076