苜蓿根瘤菌乙酰-CoA合成酶的过量表达、纯化及特性

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PCR扩增了苜蓿根瘤菌乙酰辅酶A合成酶编码基因(acsA1),克隆到连接-非依赖型载体pET30 LIC;在E.coli BL21(DE3)pLysS中得到了有效表达,表达需IPTG的诱导,诱导3h达到酶活高峰.采用His·Bind柱层析对ACS进行了纯化,纯化的酶蛋白经SDS-PAGE呈单一浓带,分子量约72000,具较高的酶活,是无细胞提取液的12.7倍.酶动力学分析显示,Vmax、Km分别为(413.6±11.7)mmol L^-1和(5.8±0.6)mmol L^-1
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