【摘 要】
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目的 建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌.方法 提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验
【机 构】
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安徽省医学科学研究院,合肥,230061
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目的 建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌.方法 提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验证所得到的重组质粒,以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260,并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品;进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性.结果 重组质粒标准品浓度在103～108 copies/μL范围内线性关系良好(r2＞0.99),实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线.志贺氏菌的检出限为100 CFU/mL.结论 本方法便捷、高效、可靠,可用于志贺氏菌的快速定性定量检测.
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