HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响

来源 :解放军医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：qjw335471690

【摘要】

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采用分子生物学方法，设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV 的Pre-C/C片段（1814～2452），经酶切后连于EBO真核表达载体，利用定点突变技术分别对连接载体进行T1862，A1896，A1899，A1

【作者】

：

林裕龙侯金林王战会孙剑阎丽骆抗先

【机构】

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第一军医大学南方医院

【出处】

：

解放军医学杂志

【发表日期】

：

2001年7期

【关键词】

：

定点突变真核表达载体基因转染乙型肝炎 HBV 前C信号肽区热点变异 sitemutagenesis eukaryotic expression vect

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采用分子生物学方法，设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV 的Pre-C/C片段（1814～2452），经酶切后连于EBO真核表达载体，利用定点突变技术分别对连接载体进行T1862，A1896，A1899，A1896+A1899点的定点诱变。经错配PCR-RFLP和测序分析，确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞，检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达，结果未突变的EBO-PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性，A189

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