【摘 要】
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本研究旨在采用新的方法找出甲状腺激素受体(TRs)介导的甲状腺激素(TH)调控的靶基因.以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为实验样本,表达并纯化了牙鲆p3 ×Flag-TRaA和p3 ×Flag
【机 构】
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上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306;上海海洋大学,教育部水产遗传资源开发利用重点实验室,上海201
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本研究旨在采用新的方法找出甲状腺激素受体(TRs)介导的甲状腺激素(TH)调控的靶基因.以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为实验样本,表达并纯化了牙鲆p3 ×Flag-TRaA和p3 ×Flag-TRβ融合蛋白,采用一种目的基因循环扩增与筛选的方法,寻找TH直接调控的靶基因,最终筛选得到TRαA的候选靶基因11个,TRβ的候选靶基因12个,其中TRaA和TRβ存在4个相同的候选靶基因:frizzled-3-like、TBC1结构域激酶(tbck)、氨酰tRNA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(aimp1)和MYC相关因子X(max).利用荧光定量PCR技术检验了这4个基因在牙鲆不同组织、不同变态发育期以及外源性甲状腺激素和硫脲处理后各个变态发育时期的表达情况,发现在TH含量升高时,靶基因表达量降低;TH含量降低时,靶基因的表达量上升,从而验证靶基因受到TH的负向调控,证实TH在促进牙鲆变态中也存在抑制靶基因转录的情况.本研究旨为研究TH调控牙鲆变态的发育网络提供基础资料.
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