【摘 要】
：
本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术，并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间，于陆军军医大学第一附属医院检验科，针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC➝ACC）、rpoB531（CAC➝TAC）和rpsL43（AAG➝AGG），分别设计锁式探针（padlockprobe，PLP）、引物和捕获探针，构建了基于磁珠的固相RCA恒温扩增反应体系，并进行了实验参数的优化。通过多色荧光探针（Cy3
【机 构】
：
陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038
论文部分内容阅读
本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术，并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间，于陆军军医大学第一附属医院检验科，针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC➝ACC）、rpoB531（CAC➝TAC）和rpsL43（AAG➝AGG），分别设计锁式探针（padlock probe，PLP）、引物和捕获探针，构建了基于磁珠的固相RCA恒温扩增反应体系，并进行了实验参数的优化。通过多色荧光探针（Cy3/Cy5/ROX）对RCA产物精准捕获与信号放大，实现了对3种突变基因的单管多重检测。进一步对该方法的灵敏度、特异性与线性范围等分析性能进行验证，结果显示同一反应体系中katG315的响应范围为1.0 pmol/L至0.1 nmol/L，rpoB531和rpsL43的响应范围为1.0 pmol/L至50.0 pmol/L和1.0 pmol/L至20.0 pmol/L，且该方法具有较好的特异度与灵敏度，在混合靶标中可精确识别单碱基突变，最低检出限低至1.0 pmol/L；在模拟血清样本的回收实验中，回收率可达95.0%~105.2%。综上，本研究构建的恒温扩增型多重检测方法可快速实现3种耐药突变位点的单管多重检测，该技术成本低廉、简便快速、不依赖大型设备，为病原体耐药基因检测提供了一种新的分析方法。
其他文献
内蒙古面临着多种类型疫源地鼠疫流行和复燃的风险。蒙古旱獭疫源地虽然暂未在国内发现动物间鼠疫流行，但过去检出过阳性血清，同时蒙古旱獭种群数量持续增加且分布范围不断扩大，毗邻的蒙古国和俄罗斯联邦的蒙古旱獭疫源地动物间鼠疫持续流行；达乌尔黄鼠疫源地动物间鼠疫时隐时现；长爪沙鼠疫源地动物间鼠疫流行猛烈，并频频波及人间。由于蒙古旱獭和达乌尔黄鼠鼠疫耶尔森菌菌株毒力明显高于长爪沙鼠鼠疫耶尔森菌菌株，且在历史上曾给当地带来深重灾难，因此内蒙古自治区鼠疫防控重点应在常规鼠疫监测的基础上，进一步加强蒙古旱獭和达乌尔黄鼠疫源
目的利用转基因斑马鱼实时观测方法进行化学物血管毒性评价。方法分别使用激光共聚焦显微成像和高内涵成像分析技术对暴露化学物后斑马鱼血管形态的时空变化进行观察及定量分析。结果采用激光共聚焦显微成像技术采集斑马鱼血管形态指标的方法操作相对简便，图片解析度高，但通量和效率较低；应用高内涵成像筛选系统采集高分辨血管图像方法，可高通量获取高质量全血管毒性数据，但对操作和实验条件要求较高。结论两种斑马鱼血管成像方法各有优劣，激光共聚焦显微成像法适合少量化学物对局部血管损害的高精度测量，高内涵成像方法适合大规模化学物血管毒
在体-离体生物感受细胞模型采用在体暴露评估、离体结局分析以及系统环境关键组分筛选的方法，评估环境污染物通过影响机体内环境稳态而导致的健康效应和毒作用机制。该模型整合了人群现场的真实暴露与实验室细胞分子机制研究，结合了体外和体内模型的优势，弥补了单一的毒理学评价模型的不足，从宏观人群研究和微观机制探索之间的介尺度层面，为环境污染物毒性测试和评价提供了新的视角和方法。
在化学物质毒性预测及风险评估中，体外细胞模型具有较高的实际应用价值。随着3D生物打印、类器官培养、器官芯片等技术的迅速发展，体外细胞模型取得了长足的进步。相比起2D细胞模型，3D细胞模型在结构、功能及生理环境上与在体组织、器官更为接近。基于3D细胞模型进行化学物质的危害识别及剂量-反应关系分析，可以获得较为准确的毒性数据，为化学物质风险评估及风险管理提供理论依据。本文概述了三种典型的3D细胞模型（人源细胞系共培养模型、3D生物打印细胞模型和类器官模型）的构建及其在化学物质毒性测试中的应用前景。
传统转录组测序（bulkRNA-seq）可以获得基因在群体细胞中的平均表达水平，但忽略了细胞反应存在差异性，很难发现敏感效应细胞，导致毒性通路识别不准确。单细胞转录组测序（scRNA-seq）解离组织单细胞并对其测序，通过细胞分群进行细胞亚群特异性转录组分析。该技术可获取化合物暴露后组织微环境中的细胞异质性反应特征，从而有助于准确判别敏感效应细胞及关键分子事件，为探索毒性机制和毒作用模式提供强大工具和崭新视角。本文概述了单细胞转录组测序的发展、原理、方法以及在毒理学机制中的应用和局限性，并展望了其未来多方
随着各种新、老化学物质健康风险评价的需求急剧增长，基于动物实验的测试方法难以满足当前健康风险评价的需求，迫切需要研发新型的、高通量、灵敏的毒性测试方法，整合基于体外替代模型的高通量筛选技术、计算方法和信息技术的毒性测试策略。其中，高内涵筛选（HCS）利用自动化显微镜和图像分析平台，以可视化和定量的方式对体外模型进行多参数、高通量的表型分析，快速有效评估化学物毒性并分级，推动了体外毒性试验和计算毒理学的发展。HCS技术已被纳入为21世纪毒性测试（Tox21）及化学物风险分级的重要工具，广泛应用于毒性测试和化
目的分析广东省2020年初国内输入疫情阶段新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）确诊病例出院后复检新型冠状病毒核酸阳性（复检阳性）特征及影响因素。方法收集广东省新冠肺炎确诊病例（发病时间在2020年3月1日以前）的人口学资料、流行病学调查及出院后标本采集与检测等信息。采用logistic回归模型分析确诊病例复检阳性的影响因素。结果研究共纳入1286例新冠肺炎确诊病例，年龄M（Q1，Q3）为44（32，58）岁，男性617例，224例为咽拭子和/或肛拭子复检阳性，复检阳性率为17.42%。复检阳性病例年龄［M（Q1，
目的分析2016—2018年上海市新泾社区糖尿病眼病的社区干预效果。方法依托“上海市糖尿病眼病综合防治服务模式建立”项目，以2016年上海市新泾社区未患糖尿病视网膜病变（DR）的且接受社区糖尿病眼病干预的糖尿病患者为研究对象，以DR发病率、视力、对DR的认知度为研究指标，分析糖尿病眼病的社区干预效果。结果共纳入糖尿病患者537例，经社区干预，DR的发病率为7.6%，糖尿病病程（OR=1.065）、糖化血红蛋白（OR=1.090）是DR发病的危险因素。干预前后单眼低视力、双眼低视力的患者分别为27例（5.0
目的了解山东省卡介苗（BCG）淋巴结炎经济负担情况。方法以2011年5月至2019年12月山东省304例申请省级补偿的BCG淋巴结炎病例为对象，收集患者基本情况、预防接种相关情况、门诊（住院）病历和收费票据等相关资料，对其直接经济负担（包括直接医疗费用和直接非医疗费用）、间接经济负担和总经济负担进行测算，比较不同特征病例经济负担的差异。结果304例BCG淋巴结炎患者月龄的M（Q1，Q3）为3（2，4）月，其中男性239例（78.6%），淋巴结破溃71例（23.4%），手术227例（74.7%）。单纯门诊、
探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistantKlebsiellapneumoniae，CRKP）碳青霉烯酶分布情况，并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistanthypervirulentKlebsiellapneumoniae，CR-hvKP）和耐碳青霉烯非高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistantnon-hypervirulentKlebsiellapneumoniae，CR-non-hvKP）两者之间的临床特征。