【摘 要】
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目的利用危重病多发性神经病（CIP）患者皮肤成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPS)系，并诱导其分化为神经细胞，为研究CIP神经细胞损害机制及治疗筛选提供细胞模型基础。方法选取临床诊断明确的CIP患者，收集患者皮肤组织，分离出皮肤成纤维细胞，对所得细胞进行原代培养，采用Millipore慢病毒转染试剂盒，将含有Oct4、Klf4、Sox2、c-Myc四个基因组合的慢病毒载体转染CIP患者皮肤成
【机 构】
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330006 南昌，南昌大学第一附属医院麻醉科,330006 南昌，南昌大学第一附属医院麻醉科,330006 南昌，南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所,330006 南昌，南昌大学第一附属医院重症医学
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目的利用危重病多发性神经病（CIP）患者皮肤成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPS)系，并诱导其分化为神经细胞，为研究CIP神经细胞损害机制及治疗筛选提供细胞模型基础。
方法选取临床诊断明确的CIP患者，收集患者皮肤组织，分离出皮肤成纤维细胞，对所得细胞进行原代培养，采用Millipore慢病毒转染试剂盒，将含有Oct4、Klf4、Sox2、c-Myc四个基因组合的慢病毒载体转染CIP患者皮肤成纤维细胞，诱导出患者来源的iPS。并采用碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、实时定量逆转录PCR、畸胎瘤成瘤等实验对诱导的iPS进行全能性鉴定，通过抑制SMAD信号通路诱导iPS分化为神经细胞。
结果培养的iPS镜下观察表现为人胚胎干细胞样克隆形态生长，碱性磷酸酶染色阳性，iPS细胞系的内源多能基因Sox2、REXl、NANOG和OCT4基因相对表达水平远远高于它们在初始的成纤维细胞中的表达水平（t值分别为-9.020、-10.753、-13.295、-12.677，P<0.01），且iPS高表达人胚胎干细胞标志性蛋白，移植到免疫缺陷型小鼠模型体内能够形成畸胎瘤，并具有向三胚层分化的特点，验证本实验建立的iPS具有全能性，并可成功诱导分化为胆碱能神经元。
结论成功建立了CIP患者iPS细胞系，该iPS细胞系可成功分化为胆碱能神经元，可为CIP的发病机制研究和临床治疗探索提供良好的细胞模型。
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