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摘 要 牛精液长期保存是牛人工授精技术的关键，牛精液冷冻保存指的是将牛精液稀释处理后，进行超低温处理，以此来长期保存牛精液。从稀释作用、保存检查、解冻使用、输精等几个方面研究了牛精液冷冻保存和使用技术的进展。
关键词 牛精液；冷冻保存；解冻；使用技术
中图分类号：S814.3 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.08.038
牛精液冷冻保存指的是在对牛精液处理后，进行超低温处理，实现牛精液长期保存的一种技术。目前，牛精液冷冻保存主要的主要步骤如下：首先，进行细管冻精的分装，然后在液氮罐等专用容器中将分装的细管冻精侵入到-196 ℃的液氮中进行保存。这种牛精液冷冻保存技术在使用牛冷冻精液时候不会受到时间和地域的限制，且不会受到牛生产年龄的影响。
1 稀释作用
对牛精液的稀释能够有效增加精液量，提升配种头数，对于提升公牛的利用率有着重要的作用。此外，对牛精液进行稀释还能够提升精液的抗冻性，避免精液在低温环境下受到损害，有效保证牛精子的养分，延长牛精液的寿命，从而方便牛精液的保存和运输[1]。目前，牛精液所采用的稀释液主要有两种：一种是无卵黄稀释液，另一种是有卵黄稀释液。稀释液能够有效保护牛精子，补充牛精子的能量，同时能够降低牛精液的黏稠度，从而避免牛精子在低温环境下受冷休克，提升牛精液低温保存的质量。在采集牛精液之后，对牛精液进行感官评测和显微镜镜检，检查合格的精液放置到密度仪中，根据监测数据来配置合适的稀释液进行稀释，保证每0.25 mL细管中牛精子的数量在800个以上，在解冻之后，牛精子的活力在35%以上。
2 保存和检查
通过程控冷冻仪来调节细管冻精的温度，在将温度从4 ℃降低到-140 ℃之后，将细管冻精转移到液氮中，等待液氮液面平稳，之后每份样品中取出3支细管冻精，将其放置到40 ℃的水中进行解冻，解冻时间控制在10 s左右，之后擦干，将两端的封口去除，利用移液管去除定量精液，在温度为37 ℃的恒温板上进行镜检，精子活力在35%以上则进行细管冻精的分装，一根拇指管装25支细管冻精，一个纱布袋桩4根拇指管，将牛号、生产日期以及牛品种等信息进行标注和记录，之后将分装好的细管冻精放置在液氮罐中进行冷冻保存[2]。在液氮罐上标注保存信息，整个过程中分装的细管冻精不能够离开液氮，之后对细管冻精的菌落数量等指标进行检测，检测合格之后则可以进行长期保存或出售。在保存期间，应当对不同液氮罐液氮消耗量进行定期检查，即使补充液氮，牛冻精保存室应当保证良好的通风，同时要避免阳光直射，防止鼠害，以此来降低对牛精液冷冻保存的影响。
3 解冻和使用
在取出冻精的过程中，为了避免纱布袋或提筒提到临界线以上，应当尽量使用长镊子取出。在取出细管冻精之后，应当轻轻甩两下，将细管冻精有棉塞的一端放置在温度为35～40 ℃的温水中，进行精液的解冻，等到细管颜色变白、精液完全融化之后即可以将细管冻精取出备用。解冻之后的精液需要的进行显微镜镜检，检测精子的活力，如果精子的活力比标准值高，则可以使用精液进行输精，为了确保受精正常，应当对细管冻精进行抽检，在输精之后留一些精子镜检。在细管冻精解冻之后应当尽快使用，及时输精，长时间的停放容易影响精液质量。在使用之后，将空管进行保留，并进行详细的记录。
4 输精
在输精的过程中，应当保证适时性，对于母牛来说，其会在发情后6～12 h排卵，而精子在母牛生殖道的存活时间一般为8～20 h；同时，精子需要2～6 h获取能量的过程，之后才能够与母牛的卵细胞结合。在输精之后，精子经过15 min就能够到达母牛的输卵管受精的位置，因此，为了提升受胎率，应当让精子尽量比母牛卵细胞早到达输卵管的受精位置[3]。
4.1 输精时间的把握
母牛发情的过程中，阴道会流出透明的液体，外阴部会出现肿胀现象，而发情结束之后，这些现象会消失。在选择输精时间的过程中，应当对母牛进行直肠检查，如果卵泡胀大且表面紧张，有一碰即破的感觉，则代表着是最佳输精时间，应当抓住时机进行输精，在输精结束之后，应当保证母牛处于安静的状态，在2 h内不进行饲喂饮水。
4.2 输精部位的把握
输精的最佳部位在母牛子宫体基部，即在母牛子宫颈内口1 cm的地方，如果输精位置过浅，精子在母牛体内会有着过大的损耗，影响精子活力，从而影响受胎，如果输精位置过深，则容易对母牛的宫内黏膜造成损伤，同样不利于受胎。
在确定母牛卵泡的发育位置之后，将解冻的精液直接输入到子宫角口内1～2 cm的地方，在输精的过程中，需要注意输精枪要避免与母牛的子宫壁接触。
4.3 输精方法的把握
在输精的过程中，一把选择直肠把握子宫颈输精的方法，具体来说，将母牛固定，左后插入到母牛的直肠中，将母牛子宫颈后端轻轻握住，右手握住输精器，将输精器沿着母牛的阴门从斜上方慢慢插入，插入距离控制在5～10 cm，避开母牛尿道口，之后改斜插为平插，将输精器送到母牛子宫颈口，慢慢的越过子宫颈管中的皱襞，在输精器到达合适的输精部位之后，慢慢地将精液注入，注入精液完成后，将输精器缓慢地抽出。
4.4 输精次数的把握
在输精的整个过程中，每一个情期进行一两次的输精即可，第一次输精一般在母牛发情盛期4～6 h进行，在第一次输精8～12 h之后，进行第二次输精。
5 牛冷冻精液的应用前景分析
目前，我国牛冷冻精液的研究相对较为成功，且应用广泛，但需要明确的是，相较于发达国家而言，我国牛冷冻精液及其使用技术还处于起步阶段，在研究和实践的过程中也遇到了一些问题。在进一步的研究过程中，应当加强创新，提升牛冷冻精液的质量，加强推广，扩大牛冷冻精液的应用范围[4]。
此外，在研究的过程中应当加强对精子分离技术的研究，针对不同的精液，应当采取差异化的冷冻保存方法，争取实现预选性别。牛精液冷冻技术与牛人工授精技术的结合是现代生物技术的一次进步，在新时期，对我国改良牛品种，保护优良的牛种质资源以及畜牧业的发展等各个方面都有着重要的作用。总的来说，牛精液冷冻保存及其实用技术应用前景十分广阔。
6 结语
牛精液冷冻保存指的是在对牛精液处理后，进行超低温处理，实现牛精液长期保存的一种技术，牛精液冷冻保存技术是牛人工受精的关键技术，本文从稀释作用、保存检查、解冻使用、输精等几个方面研究了牛精液冷冻保存和使用技术，并展望了牛精液冷冻保存技术的发展前景，旨在为推进我国牛精液冷冻保存及其使用技术的发展做出贡献。
参考文献
[1]李晓强，陈兴平，贾永红，等.牛精液冷冻技术应用研究进展[J].中国牛业科学，2006（5）：59-62，66.
[2]郝鹏，王红，解广勤，等.牛冷冻精液的应用研究进展[J].中国牛业科学，2011（3）：29-31.
[3]窦世玲.牛细管冷冻精液保存与使用技术[J].甘肃畜牧兽医，2014（10）：54，59.
[4]王鸿周，施巧婷，王二耀，等.种公牛精液冷冻保存的研究进展[J].中国牛业科学，2015（1）：57-60，67.
（责任编辑：赵中正）
关键词 牛精液；冷冻保存；解冻；使用技术
中图分类号：S814.3 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.08.038
牛精液冷冻保存指的是在对牛精液处理后，进行超低温处理，实现牛精液长期保存的一种技术。目前，牛精液冷冻保存主要的主要步骤如下：首先，进行细管冻精的分装，然后在液氮罐等专用容器中将分装的细管冻精侵入到-196 ℃的液氮中进行保存。这种牛精液冷冻保存技术在使用牛冷冻精液时候不会受到时间和地域的限制，且不会受到牛生产年龄的影响。
1 稀释作用
对牛精液的稀释能够有效增加精液量，提升配种头数，对于提升公牛的利用率有着重要的作用。此外，对牛精液进行稀释还能够提升精液的抗冻性，避免精液在低温环境下受到损害，有效保证牛精子的养分，延长牛精液的寿命，从而方便牛精液的保存和运输[1]。目前，牛精液所采用的稀释液主要有两种：一种是无卵黄稀释液，另一种是有卵黄稀释液。稀释液能够有效保护牛精子，补充牛精子的能量，同时能够降低牛精液的黏稠度，从而避免牛精子在低温环境下受冷休克，提升牛精液低温保存的质量。在采集牛精液之后，对牛精液进行感官评测和显微镜镜检，检查合格的精液放置到密度仪中，根据监测数据来配置合适的稀释液进行稀释，保证每0.25 mL细管中牛精子的数量在800个以上，在解冻之后，牛精子的活力在35%以上。
2 保存和检查
通过程控冷冻仪来调节细管冻精的温度，在将温度从4 ℃降低到-140 ℃之后，将细管冻精转移到液氮中，等待液氮液面平稳，之后每份样品中取出3支细管冻精，将其放置到40 ℃的水中进行解冻，解冻时间控制在10 s左右，之后擦干，将两端的封口去除，利用移液管去除定量精液，在温度为37 ℃的恒温板上进行镜检，精子活力在35%以上则进行细管冻精的分装，一根拇指管装25支细管冻精，一个纱布袋桩4根拇指管，将牛号、生产日期以及牛品种等信息进行标注和记录，之后将分装好的细管冻精放置在液氮罐中进行冷冻保存[2]。在液氮罐上标注保存信息，整个过程中分装的细管冻精不能够离开液氮，之后对细管冻精的菌落数量等指标进行检测，检测合格之后则可以进行长期保存或出售。在保存期间，应当对不同液氮罐液氮消耗量进行定期检查，即使补充液氮，牛冻精保存室应当保证良好的通风，同时要避免阳光直射，防止鼠害，以此来降低对牛精液冷冻保存的影响。
3 解冻和使用
在取出冻精的过程中，为了避免纱布袋或提筒提到临界线以上，应当尽量使用长镊子取出。在取出细管冻精之后，应当轻轻甩两下，将细管冻精有棉塞的一端放置在温度为35～40 ℃的温水中，进行精液的解冻，等到细管颜色变白、精液完全融化之后即可以将细管冻精取出备用。解冻之后的精液需要的进行显微镜镜检，检测精子的活力，如果精子的活力比标准值高，则可以使用精液进行输精，为了确保受精正常，应当对细管冻精进行抽检，在输精之后留一些精子镜检。在细管冻精解冻之后应当尽快使用，及时输精，长时间的停放容易影响精液质量。在使用之后，将空管进行保留，并进行详细的记录。
4 输精
在输精的过程中，应当保证适时性，对于母牛来说，其会在发情后6～12 h排卵，而精子在母牛生殖道的存活时间一般为8～20 h；同时，精子需要2～6 h获取能量的过程，之后才能够与母牛的卵细胞结合。在输精之后，精子经过15 min就能够到达母牛的输卵管受精的位置，因此，为了提升受胎率，应当让精子尽量比母牛卵细胞早到达输卵管的受精位置[3]。
4.1 输精时间的把握
母牛发情的过程中，阴道会流出透明的液体，外阴部会出现肿胀现象，而发情结束之后，这些现象会消失。在选择输精时间的过程中，应当对母牛进行直肠检查，如果卵泡胀大且表面紧张，有一碰即破的感觉，则代表着是最佳输精时间，应当抓住时机进行输精，在输精结束之后，应当保证母牛处于安静的状态，在2 h内不进行饲喂饮水。
4.2 输精部位的把握
输精的最佳部位在母牛子宫体基部，即在母牛子宫颈内口1 cm的地方，如果输精位置过浅，精子在母牛体内会有着过大的损耗，影响精子活力，从而影响受胎，如果输精位置过深，则容易对母牛的宫内黏膜造成损伤，同样不利于受胎。
在确定母牛卵泡的发育位置之后，将解冻的精液直接输入到子宫角口内1～2 cm的地方，在输精的过程中，需要注意输精枪要避免与母牛的子宫壁接触。
4.3 输精方法的把握
在输精的过程中，一把选择直肠把握子宫颈输精的方法，具体来说，将母牛固定，左后插入到母牛的直肠中，将母牛子宫颈后端轻轻握住，右手握住输精器，将输精器沿着母牛的阴门从斜上方慢慢插入，插入距离控制在5～10 cm，避开母牛尿道口，之后改斜插为平插，将输精器送到母牛子宫颈口，慢慢的越过子宫颈管中的皱襞，在输精器到达合适的输精部位之后，慢慢地将精液注入，注入精液完成后，将输精器缓慢地抽出。
4.4 输精次数的把握
在输精的整个过程中，每一个情期进行一两次的输精即可，第一次输精一般在母牛发情盛期4～6 h进行，在第一次输精8～12 h之后，进行第二次输精。
5 牛冷冻精液的应用前景分析
目前，我国牛冷冻精液的研究相对较为成功，且应用广泛，但需要明确的是，相较于发达国家而言，我国牛冷冻精液及其使用技术还处于起步阶段，在研究和实践的过程中也遇到了一些问题。在进一步的研究过程中，应当加强创新，提升牛冷冻精液的质量，加强推广，扩大牛冷冻精液的应用范围[4]。
此外，在研究的过程中应当加强对精子分离技术的研究，针对不同的精液，应当采取差异化的冷冻保存方法，争取实现预选性别。牛精液冷冻技术与牛人工授精技术的结合是现代生物技术的一次进步，在新时期，对我国改良牛品种，保护优良的牛种质资源以及畜牧业的发展等各个方面都有着重要的作用。总的来说，牛精液冷冻保存及其实用技术应用前景十分广阔。
6 结语
牛精液冷冻保存指的是在对牛精液处理后，进行超低温处理，实现牛精液长期保存的一种技术，牛精液冷冻保存技术是牛人工受精的关键技术，本文从稀释作用、保存检查、解冻使用、输精等几个方面研究了牛精液冷冻保存和使用技术，并展望了牛精液冷冻保存技术的发展前景，旨在为推进我国牛精液冷冻保存及其使用技术的发展做出贡献。
参考文献
[1]李晓强，陈兴平，贾永红，等.牛精液冷冻技术应用研究进展[J].中国牛业科学，2006（5）：59-62，66.
[2]郝鹏，王红，解广勤，等.牛冷冻精液的应用研究进展[J].中国牛业科学，2011（3）：29-31.
[3]窦世玲.牛细管冷冻精液保存与使用技术[J].甘肃畜牧兽医，2014（10）：54，59.
[4]王鸿周，施巧婷，王二耀，等.种公牛精液冷冻保存的研究进展[J].中国牛业科学，2015（1）：57-60，67.
（责任编辑：赵中正）