背景:间充质干细胞可以在体内或体外分化成肝样细胞,但是间充质干细胞数量少,在1×104~1×105 个骨髓有核细胞中仅有一个,肝细胞移植和生物人工肝的治疗都需要1×1010 级的细胞数,利用常规的单层培养方法难以实现。目的:建立一种体外分离、大量扩增培养成人骨髓间充质干细胞的方法。设计、时间及地点:随机对照实验。实验于2005-09/2006-04 在上海市消化外科研究所(上海市教委重点实验室)及上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科和器官移植中心完成。材料:骨髓标本收集于上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科骨髓检查正常者,供者均为知情同意志愿者。方法:采用 Percoll 梯度离心结合贴壁法分离人骨髓间充质干细胞。应用微载体cytodex3 培养人骨髓间充质干细胞,以普通单层聚苯乙烯(TCPS)培养作对照,用流式细胞仪(FCM)和 MTT 法对其细胞表型和增殖活性进行检测。主要观察指标:①hMSCs 的分离及培养。②hMSCs 的形态学观察。③hMSCs 在cytodex 3 表面生长时的增殖活性测定。④hMSCs 在 cytodex 3 表面生长时 FCM 细胞周期测定。结果:①流式细胞仪检测表明,微载体cytodex3 表面生长的人骨髓间充质干细胞表面标记与普通单层聚苯乙烯培养时一致,表达 CD29、CD44 和 CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、VLA-1 和 HLA-DR。②MTT 检测显示,人骨髓间充质干细胞第1~3 天处于适应期,3 d 后进入对数生长期,人骨髓间充质干细胞此期间在 TCPS 和cytodex3 表面的增殖活性无差异 (P > 0.05),而在普通单层聚苯乙烯表面培养时,人骨髓间充质干细胞 6 d 后进入衰退期,而cytodex3 表面生长第 9 天时仍然处于对数生长,差异显著(P < 0.05)。③流式细胞仪分析表明,人骨髓间充质干细胞在 TCPS 和cytodex3 表面培养细胞周期分布相同,差异不显著(P > 0.05)。结论:微载体 cytodex3 培养技术可以很好地大量扩增人骨髓间充质干细胞,并能保持其良好的增殖活性。