阐明秋水仙碱对体外培养人肾脏成纤维细胞(FB)产生炎症因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及细胞外基质的影响。
方法体外培养人胚胎肾脏FB,经不同浓度秋水仙碱(5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L、40.0 μmol/L)预处理1 h后,加入含10.0 μg/ml脂多糖(LPS)的FB完全培养液继续培养18 h,以未经LPS刺激也无秋水仙碱预处理的FB细胞为对照。实验终点收集细胞和上清。分别利用RT-PCR方法观察秋水仙碱对FB产生TGF-β1和IL-1β mRNA表达的影响;ELISA法测定细胞上清TGF-β1、IL-1β以及胶原COLⅢ、COLⅣ蛋白含量。
结果(1)单纯10.0 μg/ml LPS刺激后,FB产生TGF-β1和IL-1β mRNA分别较未经刺激的正常对照组上调3倍(RI值分别为66.1±1.6、22.3±2.0,q=590.5, P=0.002)和4.7倍(RI值分别为22.0±2.2、 4.7±0.8,q=106.8, P=0.009)。细胞上清TGF-β1和IL-1β蛋白含量均明显高于基础含量[TGF-β1分别为:(516±14)pg/ml和(420±5)pg/ml(q=80.3, P=0.012), IL-1β分别为:(3.4±0.3) pg/ml和(0.3±0.1)pg/ml(q=297.9, P=0.003)]。(2)秋水仙碱明显抑制FB之TGF-β1 mRNA以及蛋白表达,而对IL-1β mRNA以及蛋白表达水平均具有明显促进效应。(3) LPS不影响FB分泌COLⅢ和COLⅣ蛋白,不同浓度秋水仙碱干预后FB分泌COLⅢ和COLⅣ蛋白均明显减少并呈剂量依赖性。
结论(1)秋水仙碱对人肾脏FB产生和分泌TGF-β1具有显著抑制效果,而对其产生和分泌IL-1β具有促进作用。(2)秋水仙碱能够明显抑制人肾脏FB分泌COLⅢ、COLⅣ等细胞外基质。