目的分析氯化镧对TNF—α诱导的NF—KB抑制因子（IKB）激酶B（IKKβ）活化的调控作用。方法（1）体外培养Hela细胞，按照随机数字表法分为TNF-α对照组，以含20ng／mL TNF-α【的无血清RMPI1640培养液恒温培养30min；小剂量氯化镧＋TNF-α组、中等剂量氯化镧＋TNF-α组、大剂量氯化镧＋TNF-α组，3组细胞分别以含5、25、100txmol／L氯化镧的无血清RMPI1640培养液恒温培养4h后，加入含20ng／mLTNF-α的无血清RMPI1640培养液继续培养30min；氯化镧对照组，以含100Ixmol／L氯化镧的无血清RMPI1640培养液恒温培养30min；空白对照组，以无血清RMPI1640培养液恒温培养30rain，各组样本数均为3。收集各组细胞，免疫细胞荧光染色观察NF—KB／p65蛋白转位情况。（2）另取Hela细胞，同上分为5组，即TNF-α【对照组、小剂量氯化镧＋TNF．a组、中等剂量氯化镧＋TNF-α组、大剂量氯化镧＋TNF-α,组、空白对照组并行相同处理，各组样本数均为3，采用蛋白质印迹法检测胞核中NF—KB／p65蛋白表达以及胞质中IKBtx、IKKD与磷酸化IKKβ、IKKp（p-IKKβ、p-IKKp）蛋白表达；采用NF—KB／p65转录因子试剂盒检测胞核中NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性，数据以吸光度值表示。对数据进行方差分析、LSD—t检验。结果（1）空白对照组胞质中NF—KB／p65表达较强；TNF-α对照组胞核中NF-KB／p65表达较强；氯化镧对照组胞质中NF—KB／p65较空白对照组减弱；3种剂量氯化镧＋TNF一“组间比较，胞核和胞质中的NF—KB／p65表达量随着氯化镧浓度的升高而减弱，总体表达明显弱于TNF-“对照组。（2）空白对照组胞核中也有一定量的NF．KB／p65蛋白表达，TNF-α对照组胞核中NF—KB／p65蛋白表达强于空白对照组；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，胞核中NF．KB／p65蛋白表达随着氯化镧浓度升高逐渐减弱。TNF-α对照组IKBCt表达水平较空白对照组明显下降，而p-IKKβ明显上升；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，随着氯化镧浓度的升高，IKBct表达水平逐步升高，而p-IKKβ水平逐渐降低。IKKβ的表达在各组无明显差异。空白对照组p-IKKβ几乎不表达，TNF-α对照组p-IKKβ水平明显升高；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，随着氯化镧浓度的升高，p-IKKβ水平逐渐下降。TNF-α对照组NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性为0．394-0．03，明显高于空白对照组（0，t=-7．23，P〈0．01）；小剂量氯化镧＋TNF-α组、中等剂量氯化镧＋TNF-α．组、大剂量氯化镧＋TNF-α组NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性分别为0．17-I-0．03、0．154-0．03和0，均显著低于TNF-α对照组（t值分别为一6．54、一5．92、一7．23，P值均小于0．01）。结论氯化镧能通过阻断Hela细胞中IKKβ磷酸化，进而阻断NF-KB信号通路的活化。
氯化镧对肿瘤坏死因子α诱导的核因子KB抑制因子激酶β活化的调控作用
【摘 要】
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目的分析氯化镧对TNF—α诱导的NF—KB抑制因子（IKB）激酶B（IKKβ）活化的调控作用。方法（1）体外培养Hela细胞，按照随机数字表法分为TNF-α对照组，以含20ng／mL TNF-α【的无血清RMPI1640培养液恒温培养30min；小剂量氯化镧＋TNF-α组、中等剂量氯化镧＋TNF-α组、大剂量氯化镧＋TNF-α组，3组细胞分别以含5、25、100txmol／L氯化镧的无血清RMPI
【机 构】
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南昌大学第一附属医院烧伤中心,330006,南昌大学研究生院,南昌大学研究生院,南昌大学第一附属医院烧伤中心,330006,南昌大学第一附属医院烧伤中心,330006,南昌大学第一附属医院烧伤中心,3
【发表日期】
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2013年29期
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