【摘 要】
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目的 筛查与DNA聚合酶delta（polδ）最小亚基POLD4相结合的蛋白。方法 构建携带FLAG标签的POLD4融合表达质粒FLAG-POLD4-pcDNA3,转染293T细胞表达FLAG-POLD4融合蛋白，通过FLAG Pull-down技术沉淀出POLD4结合蛋白并进一步通过银染法确认差异蛋白，最后切取条带酶解后进行离子井液质联用系统质谱分析。结果 采用FLAG-pcDNA3载体构建FL
【机 构】
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深圳市罗湖区人民医院呼吸与危重症医学科
【基金项目】
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福建省卫计委中青年骨干项目（2017-ZQN-51）；
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目的 筛查与DNA聚合酶delta（polδ）最小亚基POLD4相结合的蛋白。方法 构建携带FLAG标签的POLD4融合表达质粒FLAG-POLD4-pcDNA3,转染293T细胞表达FLAG-POLD4融合蛋白，通过FLAG Pull-down技术沉淀出POLD4结合蛋白并进一步通过银染法确认差异蛋白，最后切取条带酶解后进行离子井液质联用系统质谱分析。结果 采用FLAG-pcDNA3载体构建FLAG-POLD4-pcDNA3质粒转染293T细胞并通过蛋白质印迹法验证POLD4过表达成功。通过FLAG Pull-down技术成功沉淀出POLD4蛋白，并进一步通过银染法证实了pcDNA3组与FLAG-POLD4-pcDNA3组存在差异蛋白，最后通过液质质谱分析筛选出新的可能与POLD4相结合蛋白14个。结论 FLAG Pull-down技术联合液质质谱分析初步筛选出与POLD4新的可能相结合的蛋白，为进一步研究POLD4的功能提供参考。
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