【摘 要】
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目的观察高糖和甘露聚糖结合凝集素(MBL)途径补体激活对人肾小球内皮细胞(HRGEC)表达炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探索糖尿病肾病(DN)新的发
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目的观察高糖和甘露聚糖结合凝集素(MBL)途径补体激活对人肾小球内皮细胞(HRGEC)表达炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探索糖尿病肾病(DN)新的发病机制。方法体外培养正常HRGEC,随机分为正常糖组(5mmol/LD-葡萄糖)、甘露醇组(5mmol/LD-葡萄糖+25mmol/L甘露醇)和高糖组(30mmol/LD-葡萄糖),分别培养24h后,采用实时荧光定量RCR法(real-time PCR)检测各组细胞中IL-6和TNF-α mRNA的表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-6和TNF-α的蛋白浓度。另将HRGEC随机分为单纯高糖组和高糖+MBL组,两组用30mmol/LD-葡萄糖培养24h后,加入等量30%MBL缺乏的人血清,高糖+MBL组另外加入1μg/mL MBL,继续培养4h。采用流式细胞技术和免疫荧光染色分别观察细胞表面MBL、C3和膜攻击复合物(MAC)的沉积;同时检测两组IL-6、TNF-α mRNA和蛋白的表达。结果与正常糖组和甘露醇组相比,高糖组细胞IL-6、TNF-α mRNA及蛋白表达增加(P<0.05)。流式细胞技术证实,高糖+MBL组细胞表面有明显的MBL和C3的共沉积,免疫荧光染色显示细胞表面有明显MAC沉积,单纯高糖组无上述现象;与单纯高糖组相比,高糖+MBL组细胞IL-6、TNF-α mRNA以及蛋白表达增加(P<0.05)。结论高糖可以诱导HRGEC炎症因子过表达;高糖和MBL共同存在时,MBL补体途径激活,炎症因子表达明显增加,提示MBL补体途径激活作为可能的未知发病机制对DN及其炎症状态起促进作用。
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