摘要：目的 通过对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测实验室的环境SARS-CoV-2核酸监测，发现潜在污染源并采取相应有效措施，消除或避免核酸检测实验室污染。方法 在2020年5月20日至2020年5月23日北海市中医医院医学检验科SARS-CoV-2核酸检测假阳性结果突发增多期间，对该实验室实行去污染源和环境SARS-CoV-2监测。结果 试剂准备区、标本制备处理区环境监测点SARS-CoV-2核酸检测阴性;扩增及产物分析一区为产物污染，环境监测点均检测出SARS-CoV-2核酸阳性，对操作台面、PA7600荧光定量基因扩增仪扩增仓、分析区空气进行14天SARS-CoV-2核酸监测，污染物清除期其CT值分别为37.0±1.41，36.8±2.03和37.0±2.16，污染物清除后观察期CT值分别为45.8±0.38，45.7±0.75和45.8±0.38，差异具有统计学意义（F=5.75，10.28，11.53 均P<0.05）。结论 SARS-CoV-2核酸检测实验室制定并落实环境监测制度，行之有效的预防或清除污染措施和应急预案对病原微生物安全防护极其重要。
关键词：新型冠状病毒核酸检测;实验室污染 ;环境监测
【中图分类号】G644.5 【文獻标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）13-02
新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是一种新型β属冠状病毒，单链 RNA病毒，是引发新型冠状病毒肺炎（COVID-19）主要病原微生物，基因组序列约由29kb构成，拥有10个基因，可有效编码10个蛋白[1]。据国家卫健委公布的《新型冠状病毒的肺炎诊疗方案（试行第七版）》[2]，实时荧光RT-PCR是SARS-CoV-2确诊病例的诊断标准之一，因其具有高敏感性，特异性好，操作简单等特点，成为了疫情暴发期间最主要的实验室检测手段，广范应用于各种病原学检测领域[3-6]，但实验室也极容易引起污染。依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》[7]、《实验室生物安全通用要求》（GB19489）[8]、《新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）》[9] 和《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第四版）》[10] 等要求，SARS-CoV-2核酸检测必须确保生物安全。本文旨在通过对SARS-CoV-2核酸检测实验室的环境SARS-CoV-2核酸监测，发现潜在污染源并采取相应有效措施，消除或避免核酸检测实验室污染，为SARS-CoV-2核酸检测提供建设性意见。
1材料与方法
1.1采样对象 于2020年5月20日至2020年5月23日北海市中医医院医学检验科SARS-CoV-2核酸检测假阳性结果突发增多期间，对实验室试剂准备区、标本制备处理区和扩增及产物分析一区环境监测点进行SARS-CoV-2核酸检测分析。
1.2仪器与试剂 中山达安DA7600、天隆GENTIER 96荧光定量基因扩增仪、Auto-pure32A型全自动核酸提取仪、鑫贝西生物安全柜、上海康禾H-1微型混合器、LX-300微型离心机;中山达安新型冠状病毒核酸检测试剂、广州赛百纯核酸提取试剂、H3-1采样管、带过滤芯吸头。
1.3方法
1.3.1 采样方法 于SARS-CoV-2核酸检测假阳性结果突发增多期间，实验活动与环境消毒前，物表监测点使用病毒采样拭子蘸取H3-1采样液，对操作台面、移液器表面及吸嘴、储存冰箱、传递窗把手、核酸提取仪、荧光定量基因扩增仪扩增仓、生物安全柜内壁反复涂抹，然后采样拭子回收洗脱至H3-1采样管;空气监测则使用空气沉降法，打开H3-1采样管盖子使采样液暴露于固定监测位置30Min。
1.3.2检测方法 按照SARS-CoV-2核酸检测标准程序，对核酸实验室所有工作区环境监测点进行SARS-CoV-2核酸检测，结合CT值和荧光曲线判定结果，内源性检测系统（内标，IC）曲线S型扩增，ORF1ab和N基因同时扩增（CT≤40），结果为SARS-CoV-2核酸阳性;ORF1ab和N基因无扩增（CT≥45），结果为SARS-CoV-2核酸阴性;ORF1ab和N基因无明显扩增（CT40-45），结果为检测灰区，需要重测复查;ORF1ab或N基因单通道扩增（CT≤40），重新采集标本复查，复查结果一致时，报告SARS-CoV-2 ORF1ab或N单基因核酸阳性，复查结果为双基因均阴性时，报告SARS-CoV-2核酸阴性;IC 曲线无S型扩增，需要重测或者重采标本测定[11]。所有该实验室SARS-CoV-2核酸检测阳性标本均按要求转送至北海市疾病预防控制中心核酸实验室再次复核。
1.3.3污染源清除方法 每天3次，连续7天清洗空调过滤网，对仪器设备（如基因扩增仪扩增仓与外表、生物安全柜内壁、核酸提取仪、移液器等）75%酒精擦拭，500 -1000mg/L的84消毒液擦拭工作台面、冰箱、传递窗把手，拖擦地面，作用10 min后用清水擦拭工作台面等物表，打开实验室紫外灯照射≥1 h[12-13]，保持开窗通风排气。
1.3.4污染源清除验证方法 对实验室污染区环境监测点连续14天SARS-CoV-2核酸监测，连续7天检测SARS-CoV-2核酸阴性，判定为污染源清除成功，实验室可正常使用运行。
1.3.5应急预案的启动 实验室生物安全领导小组通过环境监测结果分析污染源并进行生物安全自查，根据污染类型、范围及危害程度上报医院生物安全管理委员会，由其决定封闭污染区域，选择清除污染的方法与清除验证方法，启用备用实验用房和仪器设备，进行生物安全评估等。
1.3.6质量控制 使用中山达安试剂盒配套质控品（批号2020056）、阴性和阳性对照一同与样本检测，使用常规质量控制规则，确保可靠的实验检测质量。