【摘 要】
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为简化猪α干扰素蛋白(PoIFNα)的纯化步骤,以蛋白质自切割元件内含肽(Intein)替代蛋白酶,并以细菌自身产生的聚β-羟基丁酸酯(PHB)颗粒替代亲和配基,构建了新型内含肽介导PH
【机 构】
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宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,中山大学生命科学学院
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973)项目(2006CB504401);宁夏科技攻关项目(2008)
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为简化猪α干扰素蛋白(PoIFNα)的纯化步骤,以蛋白质自切割元件内含肽(Intein)替代蛋白酶,并以细菌自身产生的聚β-羟基丁酸酯(PHB)颗粒替代亲和配基,构建了新型内含肽介导PHB纯化PoIFNα的体系.结果显示,构建的基因工程大肠杆菌系统可成功实现PoIFNα的表达和纯化;φ(乳酸钠)=2.7%时,比较适宜工程菌的PHB累积;当诱导自切割反应温度为20℃,pH=6.5,反应时间为24~36 h时,可以实现内含肽C端高效自切割,纯化出的PoIFNα产量为20~30 mg/L.实验为重组猪α干扰素的工业化规模生产奠定了基础.
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