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摘要 [目的] 更好地提高测定食品样品中抗氧化剂时的前处理质量。 [方法] 考察了用毛细管柱气相色谱法同时测定含油脂食品中的抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ的前处理方法的研究与改进。[结果]样品经过甲醇涡旋振荡提取、冷冻过滤净化的方法处理后能有效去除油脂及各类杂质，试验回收率在95%～101%，检出限均为 1 mg/kg。[结论] 试验前处理方法具有快速、高效、精密度高、回收率高等优点，适合开展大批量产品检验工作。
关键词 BHA；BHT；TBHQ；气相色谱
中图分类号 S-03 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）19-266-02
丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）是常用的加于植物油中的抗氧化剂。其能有效地延缓油脂的氧化过程，提高食品的稳定性，显著地延长油脂及富脂食品的货架期。TBHQ更能抑制几乎所有细菌和酵母菌生长，对黄曲霉等危害人体健康的霉菌有很好的抑制作用。
抗氧化剂在当今食品行业中普遍应用。在GB/T5009.30-2003中的BHA、BHT的检测方法中，样品要经过层析柱过滤[1]。溶剂选用不合理（二硫化碳毒性大，极易挥发），检测工作量大，接触毒物多，处理过程除油脂效果差，回收率低，色谱柱也会很快报废。而在GB/T 23373-2009 《食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定》中[2]，样品提取油脂后，要先过0.45 mm滤膜，然后经过凝胶渗透色谱装置净化，才能进行检验。样品处理过程繁复，试剂多且毒性大。凝胶渗透色谱装置在各实验室中不普及且一次处理样品量不多，不适合大批量开展检测工作。
为了更好地提高样品的前处理的质量，笔者结合实际中的抗氧化剂的添加使用情况，特对其前处理方法进行研究与改进。
1 材料与方法
1.1 试验原理
甲醇提取样品中的BHA、BHT、TBHQ。处理（涡旋提取、冷冻分离、过滤等）定容后经气相色谱氢火焰检测器检测，外标法定量。
1.2 材料 供试样品：月饼、花生油、调和油、人造奶油，市售。主要试剂：乙醚，分析纯；甲醇，分析纯；BHA标准品，纯度≥99.0%；BHT标准品，纯度≥99.3%；TBHQ标准品，纯度≥99.0%。BHA、BHT、TBHQ标准储备液（1 mg/ml）：准确称取BHA、BHT、TBHQ各100 mg于100 ml容量瓶中，用甲醇定容，4 ℃冰箱中避光保存。
BHA、BHT、TBHQ标准使用液：分别吸取标准储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0 ml于一组10 ml容量瓶中，用甲醇定容。此标准系列浓度为50、100、150、200、250、500 mg/L。现用现配。
主要仪器：气相色谱仪，附FID检测器；涡旋振荡器；冰箱。
1.3 样品前处理 脂肪提取：称取样品200 g，置于250 ml具塞锥形瓶中，加入无水乙醚至浸泡完全，放置过夜，快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。称取2.00～5.00 g 脂肪于50 ml离心管中，加入10～20 ml甲醇，涡旋振荡混合3 min后置于冰箱中冷冻分层。冷冻分层后（1～2 h），溶液用中速滤纸过滤，滤液转移到25 ml容量瓶中，用少量冷冻甲醇分数次冲洗，定容（此过程一定要保证在低温时过滤完成，除油脂效果最为有效）。
1.4 色谱条件
[3] 色谱柱：毛细管柱 19091J-413 HP-5，内径0.320 mm，长度30 m，膜厚0.25 μm。柱温：100 ℃（不保留），20 ℃/min到200 ℃（不保留），然后2.5 ℃/min到210 ℃（不保留），最后30 ℃/min到300 ℃（保留1 min）。不分流进样，进样口温度和检测器温度：250 ℃。 气流条件：流速1.0 ml/min，H2：30 ml/min，空气：400 ml/min，尾吹：25 ml/min。
1.5 测定 进样1 μl标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，测定不同浓度BHA、BHT、TBHQ的峰高，以浓度为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线。同时进样1 μl试样溶液，测定峰高与标准曲线比较定量。
1.6 结果计算 按下式计算：
X=A×50m×1 000
式中，
X为试样中BHA、BHT、TBHQ含量（mg/kg）；
A为待测试样中BHA、BHT、TBHQ含量（mg/L）；
m为试样质量（g）。
计算结果保留2位有效数字。其中100 mg/L的BHA、BHT、TBHQ标准样品色谱图见图1。
2 结果与分析
试验结果表明，BHA、BHT、TBHQ在10～500 mg/kg范围内呈线性关系，其线性回归方程分别为BHA：y=1.241 1x+0.347 2，相关系数r=0.999 95；BHT：y=1.307 8x+0.154 7，相关系数r=0.999 96；TBHQ：y=1.229 3x+0.225 8，相关系数r=0.999 92。
分别用月饼、花生油、调和油、人造奶油进行试验，其结果及加标回收率如表1所示。
由表1可见，各供试样品的试验回收率在95%～101%，证明此方法精密度高，加标回收率高，具有可操作性。
3 结论
样品经处理后上机测定具有精密度高、快速、干净、回收率高等优点，该方法适合开展大批量检测工作。
参考文献
[1] 北京市卫生防疫站.GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚（BHA）与2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）的测定[S].北京：中国标准出版社，2003.
[2] 国家食品质量安全监督检验中心.GB/T 23373-2009 食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定[S].北京：中国标准出版社，2009.
[3] 叶坚，余涛.气相色谱法同时测定食品中的BHA、BHT、TBHQ[J].中国卫生检验杂志，2008，18（6）：1082-1084.
关键词 BHA；BHT；TBHQ；气相色谱
中图分类号 S-03 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）19-266-02
丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）是常用的加于植物油中的抗氧化剂。其能有效地延缓油脂的氧化过程，提高食品的稳定性，显著地延长油脂及富脂食品的货架期。TBHQ更能抑制几乎所有细菌和酵母菌生长，对黄曲霉等危害人体健康的霉菌有很好的抑制作用。
抗氧化剂在当今食品行业中普遍应用。在GB/T5009.30-2003中的BHA、BHT的检测方法中，样品要经过层析柱过滤[1]。溶剂选用不合理（二硫化碳毒性大，极易挥发），检测工作量大，接触毒物多，处理过程除油脂效果差，回收率低，色谱柱也会很快报废。而在GB/T 23373-2009 《食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定》中[2]，样品提取油脂后，要先过0.45 mm滤膜，然后经过凝胶渗透色谱装置净化，才能进行检验。样品处理过程繁复，试剂多且毒性大。凝胶渗透色谱装置在各实验室中不普及且一次处理样品量不多，不适合大批量开展检测工作。
为了更好地提高样品的前处理的质量，笔者结合实际中的抗氧化剂的添加使用情况，特对其前处理方法进行研究与改进。
1 材料与方法
1.1 试验原理
甲醇提取样品中的BHA、BHT、TBHQ。处理（涡旋提取、冷冻分离、过滤等）定容后经气相色谱氢火焰检测器检测，外标法定量。
1.2 材料 供试样品：月饼、花生油、调和油、人造奶油，市售。主要试剂：乙醚，分析纯；甲醇，分析纯；BHA标准品，纯度≥99.0%；BHT标准品，纯度≥99.3%；TBHQ标准品，纯度≥99.0%。BHA、BHT、TBHQ标准储备液（1 mg/ml）：准确称取BHA、BHT、TBHQ各100 mg于100 ml容量瓶中，用甲醇定容，4 ℃冰箱中避光保存。
BHA、BHT、TBHQ标准使用液：分别吸取标准储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0 ml于一组10 ml容量瓶中，用甲醇定容。此标准系列浓度为50、100、150、200、250、500 mg/L。现用现配。
主要仪器：气相色谱仪，附FID检测器；涡旋振荡器；冰箱。
1.3 样品前处理 脂肪提取：称取样品200 g，置于250 ml具塞锥形瓶中，加入无水乙醚至浸泡完全，放置过夜，快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。称取2.00～5.00 g 脂肪于50 ml离心管中，加入10～20 ml甲醇，涡旋振荡混合3 min后置于冰箱中冷冻分层。冷冻分层后（1～2 h），溶液用中速滤纸过滤，滤液转移到25 ml容量瓶中，用少量冷冻甲醇分数次冲洗，定容（此过程一定要保证在低温时过滤完成，除油脂效果最为有效）。
1.4 色谱条件
[3] 色谱柱：毛细管柱 19091J-413 HP-5，内径0.320 mm，长度30 m，膜厚0.25 μm。柱温：100 ℃（不保留），20 ℃/min到200 ℃（不保留），然后2.5 ℃/min到210 ℃（不保留），最后30 ℃/min到300 ℃（保留1 min）。不分流进样，进样口温度和检测器温度：250 ℃。 气流条件：流速1.0 ml/min，H2：30 ml/min，空气：400 ml/min，尾吹：25 ml/min。
1.5 测定 进样1 μl标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，测定不同浓度BHA、BHT、TBHQ的峰高，以浓度为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线。同时进样1 μl试样溶液，测定峰高与标准曲线比较定量。
1.6 结果计算 按下式计算：
X=A×50m×1 000
式中，
X为试样中BHA、BHT、TBHQ含量（mg/kg）；
A为待测试样中BHA、BHT、TBHQ含量（mg/L）；
m为试样质量（g）。
计算结果保留2位有效数字。其中100 mg/L的BHA、BHT、TBHQ标准样品色谱图见图1。
2 结果与分析
试验结果表明，BHA、BHT、TBHQ在10～500 mg/kg范围内呈线性关系，其线性回归方程分别为BHA：y=1.241 1x+0.347 2，相关系数r=0.999 95；BHT：y=1.307 8x+0.154 7，相关系数r=0.999 96；TBHQ：y=1.229 3x+0.225 8，相关系数r=0.999 92。
分别用月饼、花生油、调和油、人造奶油进行试验，其结果及加标回收率如表1所示。
由表1可见，各供试样品的试验回收率在95%～101%，证明此方法精密度高，加标回收率高，具有可操作性。
3 结论
样品经处理后上机测定具有精密度高、快速、干净、回收率高等优点，该方法适合开展大批量检测工作。
参考文献
[1] 北京市卫生防疫站.GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚（BHA）与2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）的测定[S].北京：中国标准出版社，2003.
[2] 国家食品质量安全监督检验中心.GB/T 23373-2009 食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定[S].北京：中国标准出版社，2009.
[3] 叶坚，余涛.气相色谱法同时测定食品中的BHA、BHT、TBHQ[J].中国卫生检验杂志，2008，18（6）：1082-1084.