【摘 要】
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目的:建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法,为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法.
方法:根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌LasI基
【机 构】
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河北省实验动物重点实验室,河北医科大学实验动物学部,石家庄050000河北医科大学第二医院,石家庄050000
【出 处】
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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会
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目的:建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法,为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法.
方法:根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌LasI基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因和细菌通用16S rRNA基因设计出特异性引物;经过多重PCR引物浓度和退火温度的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系.应用该PCR体系对人工感染标本、实验动物粪便样本进行验证检测,与传统检测方法对比.
结果:多重PCR分别扩增出金黄色葡萄球菌(153bp)、绿脓杆菌(600bp)、肺炎克雷伯杆菌(368bp)和通用(520bp)的目的条带.多重敏感性为10pg,特异性检测未从其他细菌中检测出目的条带.应用建立的多重PCR体系检测出不同组合的人工感染标本,从76只粪便检测出绿脓杆菌阳性1例,与传统检测方法结果一致.
结论:本文建立的多重PCR方法具有特异、灵敏、简便、快速等优点,为实验动物微生物的快速检测提供了可靠的方法.
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