研究微小RNA(miRNA,miR)-518b对肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。
方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-518b在肝癌和正常肝细胞株的表达。HepG2细胞株分成miR-518b过表达组(miR-518b组)、阴性对照组(miR-Con组)及空白对照组(Blank组)。噻唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞术测定凋亡,Transwell测定侵袭。分光光度比色法测定半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9活性,蛋白质印迹法(Western blot)测定Rap1b蛋白表达,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。
结果miR-518b在肝癌细胞株中表达下调。转染后72、96 h,miR-518组吸光度(A)490 nm低于miR-Con组(0.66±0.07比0.94±0.08,t=3.291,P<0.05)及(0.86±0.07比1.47±0.10,t=3.943,P<0.01),凋亡率高于miR-Con组及Blank组[(21.4±3.2)%比(7.5±1.2)%比(6.8±1.1)%,t=13.287,P<0.05]。miR-518b组Caspase-3、Caspase-9相对活力高于miR-Con组和Blank组(2.10±0.20比1.02±0.04比1.04±0.05,t=16.287,P<0.05),(2.20±0.20比1.03±0.03比1.04±0.03,t=16.298,P<0.05)。3组Caspase-8相对活力差异无统计学意义(t=8.288,P>0.05)。miR-518b组侵袭细胞数少于miR-Con组和Blank组(74±10比151±15比153±12,t=17.276,P<0.05),Rap1b表达量低于miR-Con组和Blank组(0.38±0.03比1.03±0.06比1.05±0.04,t=19.642,P<0.05)。
结论miR-518b在肝癌细胞株中下调表达,过表达miR-518b可抑制增殖和侵袭,诱导凋亡,其机制与Caspase-3、Caspase-9上调及Rap1b下调表达有关。