目的 探讨乳腺癌多西紫杉醇(DOC)耐药细胞(MCF-7/DOC)和阿霉素(ADM)耐药细胞(MCF-7/ADM)对Exosomes的分泌功能及其在耐药性传递中的作用.方法 采用超速分级离心的方法,从乳腺癌耐药细胞培养液上清中提取Exosomes,透射电镜下观察其形态特征,Western blot法检测乳腺癌耐药细胞和Exosomes中标志蛋白的表达情况.利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌亲本敏感细胞系GFP-MCF-7/S,通过细胞间耐药实验和Exosomes传递耐药性实验观察耐药性传递现象.结果 与MCF-7/S细胞相同,MCF-7/DOC和MCF-7/ADM细胞也分泌Exosomes,均为圆形或椭圆形的膜性囊泡,直径为30 ～ 100 nm.Exosomes仅表达Exosomes标志性蛋白Tsg101,不表达内质网标志蛋白Calnexin.MCF-7/S、MCF-7/DOC或MCF-7/ADM细胞与GFP-MCF-7/S细胞共培养72 h后,荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别.但在加入化疗药物DOC或ADM处理24 h后,MCF-7/DOC+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为65.5％,明显高于MCF-7/S+ GFP-MCF-7/S组细胞(25.5％,P＜0.001);MCF-7/ADM+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为53.6％,亦明显高于MCF-7/S+ GFP-MCF-7/S组细胞(25.4％,P＜0.001).MCF-7/S、MCF-7/DOC或MCF-7/ADM细胞来源的Exosomes与GFP-MCF-7/S细胞共培养48 h后,荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别.但在加入化疗药物DOC或ADM处理24h后,MCF-7/DOC来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为59.9％,明显高于MCF-7/S来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞(32.4％,P＜0.001);MCF-7/ADM来源的Exosomes+GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为58.3％,亦明显高于MCF-7/S来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞(27.2％,P＜0.001).结论 乳腺癌细胞间存在着耐药性传递的现象,Exosomes可能是耐药信息传递的转运载体.
乳腺癌耐药细胞来源的Exosomes的分离鉴定及其在耐药传递中的作用
【摘 要】
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目的 探讨乳腺癌多西紫杉醇(DOC)耐药细胞(MCF-7/DOC)和阿霉素(ADM)耐药细胞(MCF-7/ADM)对Exosomes的分泌功能及其在耐药性传递中的作用.方法 采用超速分级离心的方法,从乳腺癌耐药细胞培养液上清中提取Exosomes,透射电镜下观察其形态特征,Western blot法检测乳腺癌耐药细胞和Exosomes中标志蛋白的表达情况.利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白
【机 构】
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(210009南京医科大学附属肿瘤医院江苏省肿瘤医院临床检验中心),(210009南京医科大学附属肿瘤医院江苏省肿瘤医院临床检验中心),(210009南京医科大学附属肿瘤医院江苏省肿瘤医院临床检验中心
【出 处】
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中华肿瘤杂志
【发表日期】
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2014年36期
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