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目的 构建MUC1/Y全长cDNA真核表达载体,并以MUC1及MUC1/Y真核表达载体修饰树突状细胞(DC)诱导特异性抗肿瘤免疫.方法构建MUC1/Y DNA真核表达载体,选取10例HLA-A2乳腺癌患者,体外IL-4、GM-CSF联合诱导DC,并以pCDNA3.1-MUC1和pCDNA3.1-MUC1/Y转染DC,同时以空载体为对照,以pIRES2-EGFP-MUC1/Y观察转染效率,转染后DC与自体T细胞混合培养,诱导CTL.以MCF-7为特异性靶细胞,Raji为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性,以anncxin V-FTTC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况.以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力.结果酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1/Y真核表达载体pIReS2-EGFP-MUC1/Y和pCDNA3.1-MUC1/Y.pIRES2-EGFP-MUC1/Y转染效率基本为10%左右,DC中MUC1表达率为8%.杀伤实验表明T-DC-pCDNA3.1-MUC的杀伤活性为64%,T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y为46%.这两组间差异有显著性,同时与对照组比较差异均有显著性.annexin V-FTTC标记实验显示,T-DC-pCDNA3.1-MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y及对照组.基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力显著升高.结论构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-MUC1/Y可用于真核细胞转染并观察转染效率,易于筛选阳性克隆.经pCDNA3.1-MUC1及pCDNA3.1-MUC1/Y修饰的DC可有效诱导特异性免疫应答。