【摘 要】
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[目的]研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法]不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(m ESCs)4 d,
【机 构】
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沈阳医学院公共卫生学院毒理学教研室;
【基金项目】
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辽宁省自然科学基金项目(编号:2015020397);辽宁省大学生创业计划项目(编号:20141064000006);沈阳医学院科学研究基金(编号:20145065,20151001)
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[目的]研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法]不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(m ESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;应用碱性磷酸酶染色法、real-time PCR及Western blot分别检测其分化情况、胚胎干细胞多能性相关转录因子SOX2、OCT4基因及其蛋白表达水平。[结果]随着MEHP染毒浓度的增加,m ESCs克隆的细胞团逐渐缩小,且数量也出现减少,以1 000μmol/L组尤为明显;细胞凋亡检测结果发现,随着染毒浓度增加,凋亡率呈增加趋势,与对照组相比,仅1 000μmol/L组m ESCs总细胞凋亡率[(9.58±2.02)%]的升高有统计学意义(P<0.05)。碱性磷酸酶染色结果显示,1 000μmol/L组m ESCs着色较浅,甚至未着色,即出现分化倾向,而其他组m ESCs均被染成深蓝色或蓝紫色。与对照组相比,100、1 000μmol/L组中SOX2、OCT4基因表达降低(均P<0.05);1 000μmol/L组SOX2、OCT4蛋白表达降低(均P<0.05)。[结论]一定浓度MEHP对m ESCs存在细胞毒性,抑制m ESCs正常生长,降低m ESCs中多能性相关转录因子SOX2、OCT4的表达,进而影响胚胎早期发育。
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