【摘 要】
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以CRP为免疫原免疫双峰驼后分离外周血淋巴细胞,提取总RNA后经逆转录制备cDNA,通过巢式PCR实验获得目的基因片段并克隆至噬菌体T7载体臂上,构建原始噬菌体库。随后进行4轮生
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院,新疆农垦科学院/省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,CollegeofVeterinaryMedicine
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(31873006,31572556),乌鲁木齐市科技计划项目(P16130001),省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室优秀中青年人才培养引导计划专项(SKLSGIHP2017A03)
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以CRP为免疫原免疫双峰驼后分离外周血淋巴细胞,提取总RNA后经逆转录制备cDNA,通过巢式PCR实验获得目的基因片段并克隆至噬菌体T7载体臂上,构建原始噬菌体库。随后进行4轮生物淘选,通过Phage-ELISA鉴定淘选后的噬菌体库,Bam HⅠ、Hin dⅢ双酶切构建了pET-28a与阳性克隆的重组质粒,转化入BL21菌株中进行低温诱导表达。经过His-镍离子亲和层析柱纯化获得单域抗体,然后再用间接ELISA鉴定单域抗体与CRP的反应性。研究结果显示,试验成功构建了库容为1.08×10^8 c
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