【摘 要】
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目的 研究与成骨细胞共培养对软骨细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1通路的影响及其机制.方法 采用胰酶消化法从新生小鼠膝关节及颅骨处分别提取软骨细胞和成骨细胞.使用6孔板(培养软骨细胞)和Transwell小室(培养成骨细胞)构建两种细胞的共培养体系.使用qRT-PCR分析共培养24 h后软骨细胞中HIFs及其靶基因丙酮酸脱氢酶激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase 1,PDK1)的mRNA表达变化;Western blot用于检测共
【机 构】
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口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院 牙体牙髓病科 成都 610041
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目的 研究与成骨细胞共培养对软骨细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1通路的影响及其机制.方法 采用胰酶消化法从新生小鼠膝关节及颅骨处分别提取软骨细胞和成骨细胞.使用6孔板(培养软骨细胞)和Transwell小室(培养成骨细胞)构建两种细胞的共培养体系.使用qRT-PCR分析共培养24 h后软骨细胞中HIFs及其靶基因丙酮酸脱氢酶激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase 1,PDK1)的mRNA表达变化;Western blot用于检测共培养48 h后软骨细胞中HIFs、PDK1蛋白表达以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路的改变;活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色以显示共培养48 h后软骨细胞ROS生成变化.结果 qRT-PCR和Western blot结果表明,软骨细胞和成骨细胞共培养后软骨细胞中HIF-1α的基因和蛋白表达水平上升(P<0.05);HIF-1靶基因PDK1的基因和蛋白水平同样上调(P<0.05);ROS染色显示与成骨细胞共培养使软骨细胞ROS生成减少;Western blot检测到共培养软骨细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2和p38信号增强(P<0.05).结论 与成骨细胞共培养增强了软骨细胞ERK1/2和p38信号,上调了软骨细胞的HIF-1通路.
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