【摘 要】
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利用富集文库-菌落原位杂交的方法筛选半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)微卫星标记,构建富含(AC)和(AG)序列重复的半滑舌鳎微卫星富集文库,随机从文库中挑选1060个克隆,筛选
【机 构】
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中国海洋大学海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室; 山东莱州明波水产有限公司;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30901098)
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利用富集文库-菌落原位杂交的方法筛选半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)微卫星标记,构建富含(AC)和(AG)序列重复的半滑舌鳎微卫星富集文库,随机从文库中挑选1060个克隆,筛选得到883个(83.3%)阳性信号,菌落PCR检测742个阳性克隆片段的长度在500~1 200 bp范围内,随机挑选其中50个克隆进行测序,共设计引物33对,进行退火温度优化、多态性检测后,共得到20个多态的半滑舌鳎微卫星标记。对其进行分离方式分析,其中有17个位点符合孟德尔分离定律,共表现5种分离方式,可用于半滑舌鳎遗传连锁图谱的构建;另外有3个位点偏离孟德尔分离定律(P<0.05)。结果同时证明富集文库-菌落原位杂交是半滑舌鳎微卫星标记大量筛选和高密度遗传连锁图谱构建的一种行之有效的方法。
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