【摘 要】
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以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORFI全长序列.目的片段及原核表达载体pET32(b)分别经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切
【机 构】
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海南大学环境与植物保护学院,中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室
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以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORFI全长序列.目的片段及原核表达载体pET32(b)分别经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,连接构建重组质粒pET32-ORF Ⅰ,将鉴定为正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得原核表达OFR Ⅰ工程菌.工程菌在28℃条件下,用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达6h,离心收集菌液并超声波破碎,获得以含目的肽段的可溶性蛋白为主的融合蛋白.将融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,得到纯度较高的融合蛋白.以此蛋白为抗原免疫家兔,获得特异抗血清,该抗血清的效价达1∶100000,Western Blot验证表明,抗血清的特异性较强.本研究为BSV的快速检测以及BSV编码蛋白的功能研究奠定了基础.
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