【摘 要】
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目的:构建核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-like-2,NFE2L2)基因敲除的肺腺癌A549细胞,研究NFE2L2对细胞增殖和顺铂敏感性的影响.方法:利用CRISPR/Cas9技术,构建敲除NFE2L2基因的pLenti CRISPR v2-NFE2L2质粒,通过慢病毒转染体系筛选稳定细胞株,基因组测序和West-ern Blot法验证NFE2L2敲除成功.采用平板克隆形成实验、细胞计数法和Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力,采用CCK8法检
【机 构】
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徐州医科大学附属淮安医院呼吸与危重症医学科,江苏 淮安 233001;江苏护理职业学院,江苏 淮安 223005
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目的:构建核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-like-2,NFE2L2)基因敲除的肺腺癌A549细胞,研究NFE2L2对细胞增殖和顺铂敏感性的影响.方法:利用CRISPR/Cas9技术,构建敲除NFE2L2基因的pLenti CRISPR v2-NFE2L2质粒,通过慢病毒转染体系筛选稳定细胞株,基因组测序和West-ern Blot法验证NFE2L2敲除成功.采用平板克隆形成实验、细胞计数法和Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力,采用CCK8法检测药物敏感性.结果:基因组测序提示包括NFE2L2第四外显子在内的227 bp碱基缺失,Western Blot显示NFE2L2及其下游蛋白均未见表达,表明NFE2L2敲除的A549细胞构建成功.敲除NFE2L2后,A549细胞单克隆形成能力、迁移能力和细胞生长速度均降低,且对顺铂敏感性增加.结论:敲除NFE2L2基因能抑制A549细胞的增殖,并增强其对顺铂的敏感性.
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