【摘 要】
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目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持.方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小
【机 构】
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吉林大学药学院生物工程试验中心,吉林长春,130021;吉林大学第一医院第二手术室,吉林长春,130021;吉林大学药学院生物工程试验中心,吉林长春130021;吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室,
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目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持.方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养,待细胞爬出后,用免疫组织化学方法检测细胞角质素18(CK-18)的表达情况,采用流式细胞术对第0、1和2(P0、P1、P2)代细胞的CK-18表达情况进行分析,用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力.结果:肾小管节段培养24 h后,可见细胞从节段内爬出；培养72 h后,细胞呈铺路石样密集生长.随着传代进行,P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9％、91.5％和76.8％,肾小管上皮细胞逐渐死亡,P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P＜0.05),同时培养体系中杂细胞增多.结论:该方法经济可靠、简便易行,但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次,不能长期培养,仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用.
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