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摘要：目的：建立小儿肾病颗粒中五味子甲素的含量测定方法，为该制剂提供质量控制标准。方法：应用高效液相色谱法，Kromasil C18色谱柱（4.6mm×200mm，5?m），流动相：乙腈-水（60：40），流速：1.0ml·min-1，对小儿肾病颗粒中五味子甲素进行含量测定。结果：五味子甲素平均回收率分别为100.04%（RSD为1.03%）。结论：本方法操作简便，结果准确、可靠，可有效控制该制剂的质量。
关键词：HPLC；小儿肾病颗粒；五味子甲素
小儿肾病颗粒由五味子、苏叶、麦冬、知母、泽泻、白术、陈皮等药材组成，具有滋肾育阴、健脾利湿之功，用于治疗小儿肾病中肝肾阴虚，脾虚湿困，三焦气化失司所致的小儿肾病水肿。其中五味子为主要药物，五味子甲素为其主要有效成分之一。本研究采用高效液相色谱法测定五味子甲素的含量，取得了理想的检测结果，为有效控制该制剂的质量提供了较好的依据。
1 仪器与试药
1.1 分析仪器
Waters 公司600E型，2487型UV/Vis检测器；
Millenniμm32色谱工作站数据处理系统；
H66025MC超声波清洗器（无锡市超声电子设备厂）；
1.2 试药
五味子甲素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；
乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
Kromasil C18柱（4.6×200mm，5μm），流动相：乙腈-水（60：40），检测波长：254nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，理論塔板数按五味子甲素峰计算不低于3000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
取五味子甲素对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.25mg/ml的溶液。此作为五味子甲素对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取颗粒5.0g，精密称定，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取10小时，提取液蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，备用。
2.2.3 阴性对照样品溶液的制备
取不含五味子药材的处方中其它药物，按照相同工艺制得阴性对照样品，再按上述供试品溶液的制备方法，制得阴性对照样品溶液。
2.2.4 阴性对照试验
精密吸取对照品溶液、供试样品溶液、阴性对照样品溶液各10μl，按照2.1项下的色谱条件，进样，测得HPLC图谱。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液5、8、10、15、20μl，按上述色谱条件下测定，记录峰面积的积分值和进样量，五味子甲素在1.25μg～5.00μg范围内峰面积与进样量微克数有良好的线性关系，其回归方程为：Y=3.64×105X+4.45×104 （r=0.9996）。
2. 4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，测得RSD=0.4%（n=5）。
2.5 稳定性试验 精密吸取同一样品试液，分别在0、2、6、8、12小时进样测定，得RSD=1.4%（n=5）。
2.6 重现性试验
精密称取同一批小儿肾病颗粒内容物各5份，按制剂供试品溶液制备，并按上述色谱条件测定，用外标一点法计算，测定结果，RSD为0.6%。
2.7 加样回收率试验
分别精密称取已知含量的样品5份，每份约2.5g，分别加入五味子甲素对照品0.75mg，混匀后，分别按制剂供试品溶液项下提取，按上述色谱条件测定，结果见表1。
2.8 样品的含量测定
称取3批不同批号的小儿肾病颗粒，按“供试品溶液的制备”项制成样品溶液，按上述色谱条件测定五味子含量，进样量10μl，结果见表2。
3 讨论
3.1本试验对样品的提取条件进行了考察，按2015年版药典一部收载品种五味子[含量测定][1]项下的方法制备供试品溶液，结果干扰成分较多，改进提取条件后，发现干扰成分较少。同时多次试验表明，正己烷比甲醇和氯仿更能较完全的提取出五味子甲素，同时样品溶液中的干扰成分较少，故本试验采取正己烷作为样品的提取溶剂。
3.2 本试验采用高效液相色谱法测定小儿肾病颗粒中五味子甲素的含量，并对柱温和流动相进行了考察。结果表明：在室温条件下，保留时间较长，超过30分钟，因此柱温采用40℃为好；另外，采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水作流动相进行对比，结果发现用乙腈-水（60：40）作流动性能使样品溶液中的各成分得到更好的分离。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2015年版一部.北京：中国医药科技出版社，2015：67.
关键词：HPLC；小儿肾病颗粒；五味子甲素
小儿肾病颗粒由五味子、苏叶、麦冬、知母、泽泻、白术、陈皮等药材组成，具有滋肾育阴、健脾利湿之功，用于治疗小儿肾病中肝肾阴虚，脾虚湿困，三焦气化失司所致的小儿肾病水肿。其中五味子为主要药物，五味子甲素为其主要有效成分之一。本研究采用高效液相色谱法测定五味子甲素的含量，取得了理想的检测结果，为有效控制该制剂的质量提供了较好的依据。
1 仪器与试药
1.1 分析仪器
Waters 公司600E型，2487型UV/Vis检测器；
Millenniμm32色谱工作站数据处理系统；
H66025MC超声波清洗器（无锡市超声电子设备厂）；
1.2 试药
五味子甲素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；
乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
Kromasil C18柱（4.6×200mm，5μm），流动相：乙腈-水（60：40），检测波长：254nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，理論塔板数按五味子甲素峰计算不低于3000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
取五味子甲素对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.25mg/ml的溶液。此作为五味子甲素对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取颗粒5.0g，精密称定，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过夜，于80～85℃回流提取10小时，提取液蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，备用。
2.2.3 阴性对照样品溶液的制备
取不含五味子药材的处方中其它药物，按照相同工艺制得阴性对照样品，再按上述供试品溶液的制备方法，制得阴性对照样品溶液。
2.2.4 阴性对照试验
精密吸取对照品溶液、供试样品溶液、阴性对照样品溶液各10μl，按照2.1项下的色谱条件，进样，测得HPLC图谱。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液5、8、10、15、20μl，按上述色谱条件下测定，记录峰面积的积分值和进样量，五味子甲素在1.25μg～5.00μg范围内峰面积与进样量微克数有良好的线性关系，其回归方程为：Y=3.64×105X+4.45×104 （r=0.9996）。
2. 4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，测得RSD=0.4%（n=5）。
2.5 稳定性试验 精密吸取同一样品试液，分别在0、2、6、8、12小时进样测定，得RSD=1.4%（n=5）。
2.6 重现性试验
精密称取同一批小儿肾病颗粒内容物各5份，按制剂供试品溶液制备，并按上述色谱条件测定，用外标一点法计算，测定结果，RSD为0.6%。
2.7 加样回收率试验
分别精密称取已知含量的样品5份，每份约2.5g，分别加入五味子甲素对照品0.75mg，混匀后，分别按制剂供试品溶液项下提取，按上述色谱条件测定，结果见表1。
2.8 样品的含量测定
称取3批不同批号的小儿肾病颗粒，按“供试品溶液的制备”项制成样品溶液，按上述色谱条件测定五味子含量，进样量10μl，结果见表2。
3 讨论
3.1本试验对样品的提取条件进行了考察，按2015年版药典一部收载品种五味子[含量测定][1]项下的方法制备供试品溶液，结果干扰成分较多，改进提取条件后，发现干扰成分较少。同时多次试验表明，正己烷比甲醇和氯仿更能较完全的提取出五味子甲素，同时样品溶液中的干扰成分较少，故本试验采取正己烷作为样品的提取溶剂。
3.2 本试验采用高效液相色谱法测定小儿肾病颗粒中五味子甲素的含量，并对柱温和流动相进行了考察。结果表明：在室温条件下，保留时间较长，超过30分钟，因此柱温采用40℃为好；另外，采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水作流动相进行对比，结果发现用乙腈-水（60：40）作流动性能使样品溶液中的各成分得到更好的分离。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2015年版一部.北京：中国医药科技出版社，2015：67.