目的对小鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)的体外培养方法进行优化。方法从小鼠获取骨髓细胞,用含因子的完全培养基于37℃5%CO2培养箱中培养,3 h后弃去上清,加入相同因子浓度的完全培养基继续培养,48 h收集上清细胞离心后种于6孔板中以上培养基继续培养,96 h后换液处理,第8天时添加LPS刺激作为LPS刺激组,未添加LPS作为对照组,结合流式细胞仪(FCM)、酶联免疫吸附技术(ELISA)等从细胞形态、表面分子[B7-2分子(CD86)]及主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的特异性表达、相关因子[白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-10(IL-10)]分泌及诱导T淋巴细胞的增殖能力等进行鉴定。结果镜下观察细胞有明显的不规则枝状突起,有典型DCs形态特征。流式结果显示细胞纯度为77.4%左右;经LPS刺激后树突细胞CD86、MHCⅡ的比例均明显增加(P<0.001);ELISA结果显示与对照组相比,LPS刺激组IL-12、IL-10的含量明显增加(P<0.01),IL-12的表达量增加约18倍,IL-10的表达量增加约2倍。MLR混合淋巴细胞反应结果显示经LPS刺激后LPS刺激组细胞诱导T淋巴增殖能力显著增强(P<0.05)。结论树突细胞体外原代培养48 h后,选用上清细胞继续培养可以获得纯度较高性能较好的DCs。